链霉菌CPCC 203702抗结核分枝杆菌次级代谢产物研究-微生物与生化药学专业毕业论文.docxVIP

学校代码：10023学 学校代码：10023 学 号：$2012010021 硕士学位论文 链霉菌CPCC 203702抗结核分枝杆菌次级代谢产物 研究 所 院： 医药生物技术研究所 姓 名： 张新明 指导教师： 余利岩研究员 导师小组： 余利岩张德武 学科专业： 微生物与生化药学 研究方向： 抗感染药物研究 完成日期： 2015年6月 万方数据 中用医学科学院·北京协和医学院·硕士学位论文fIII 中用医学科学院·北京协和医学院·硕士学位论文 fIII I I UlII III I III l U IIf Y281 8086 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或撰写 过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我 一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作J，明确的说明并表示谢 意。 学位论文作者签名：张新6R 签字日期： 驴／，年 月／2_日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解j堕塞盐塑医堂瞳有关保存、使用学位论文的管理 办法。有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查 阅和借阅。本人授权j丝塞垃塑医堂瞳可以将学位论文的全部或部分内容编入有关 数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：茄新aA 导师签名：余赤-右 签字日期：bff年(’月，p日 签字E1期： 洳s年g月ft Et 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 电话： 通讯地址： 邮编： 万方数据 中国医学科学院·北京协和医学院·硕士学位论文目录 中国医学科学院·北京协和医学院·硕士学位论文 目录 目 录 ．I 中文摘要 l Abstract． ．． ．．．． ．．．．．．． ． ．．．．．．．． ．．．．．．． ．． ． ．．．．． ．．2 缩略语一览表 3 前言一 ．． 一 一 一一一～一一 一一一一一 一．．一一 一一一．．一一 一 ．．j 4 实验材料 9 1．菌株 9 2．主要培养基 9 2．1检定培养基 9 2．2斜面培养基 9 2．3发酵培养基 一10 3．主要试剂 ．11 4．主要仪器 ．12 5．相关溶液的配制 ．13 5．1 SDS．PAGE相关溶液 ．13 5．2蛋白纯化相关溶液 一13 5．3酶活性检测相关溶液 ．．13 5．4其他溶液 ．14 实验方法 15 一．链霉菌CPCC 203702发酵条件摸索及放大发酵 ．1 5 1．斜面培养基的确定 ．15 2．发酵时间的确定 ．15 3．链霉菌CPCC 203702放火发酵 1 5 二．抗耻垢分枝杆菌活性导向的次级代谢产物的分离纯化及结构鉴定 一1 5 1．活性次级代谢产物的发现 ．15 1．1发酵液初步处理 一15 1．2活性导向的分离纯化过程 一16 1．3化合物结构解析 ．．1 7 1．4化合物活性初步评价 一17 2．Berninamycin类抗牛素新组分的发现与鉴定 ．18 2．1分离纯化过程 一18 2．2化合物结构解析 ．．20 万方数据 中国医学科学院·北京协和医学院·硕士学位论文2．3化合物活性初步评价 中国医学科学院·北京协和医学院·硕士学位论文 2．3化合物活性初步评价 ．．20 三．抑制结核分枝杆菌PDF活性导向的次级代谢产物分离纯化与结构鉴定 ．20 1．目的蛋白的纯化 ．20 1．1样品处理 一20 1．2使用AKTA explorer系统纯化蛋白 20 1．3蛋白脱盐、脱咪唑及浓缩 一21 1．4 SDS．PAGE电泳检测 21 1．5蛋白浓度测定 一22 2．酶活性榆测 ．23 2．1蛋白活性测定原理 一23 2．2酶活性测定步骤 ．．23 2．3酶抑制率计算公式 ．．23 3．活性次级代谢产物的发现 ．23 3．1活性导向的分离纯化过程 23 3．2化合物活性测定 ．．24 四．其他化合物的分离纯化与结构鉴定 ．．24 1．卜-清液乙酸乙酯部分 ．24 2．菌丝体甲醇抽提物乙酸乙酯部分 ．26 实验结果与分析 一27 一．链霉菌CPCC 203702发酵条件摸索及放大发酵 ．27 1．斜面培养基的确定 ．27 2．发酵时间的确定 ．27 3．链霉菌CPCC 203702的放大发酵 27 二．抗耻垢分枝杆菌活性导向的代谢产物的分离纯化及结构鉴定 一27 1．活性次级代谢产物的发现 ．27 1．1发酵液初步处理及活性结果 一27 1．2活性导向的分离纯化过程 一28 1．3化合物结构鉴定 一29 1．4化合物活性初步评价 ．．34 2．Berninamyci