三氧化二砷对人乳腺癌雌激素受体表达的影响-肿瘤学专业论文.docxVIP

lIIIIit lIIIIit I t1111111 III]11111 IIII I Y1 93 1 345 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者：饧研 日期． M年，月矿7日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者： 响弛 日期： ≯∥年上月一日 L 摘要三氧化二砷对人乳腺癌雌激素受体表达的影响 摘要 三氧化二砷对人乳腺癌雌激素受体表达的影响 研究生：杨建华 导师：王留兴 郑州大学第一附属医院肿瘤科 河南郑州450052 摘要 背景和目的： 近年来乳腺癌的发病率和死亡率增长速度较快，全世界每年患乳腺癌的女 性约130万人，而死于乳腺癌的有50万人。虽然我国的乳腺癌属于低发，但近年 来其发病率增长幅度较快，预i贝lJ20年后将会成为我国发病率最高的恶性肿瘤。 雌激素受体(estrogen receptor ER)在乳腺癌的发生发展过程中，扮演着重 要角色。在体内通过与雌激素的结合，激活含雌激素应答元件基因和含有其他 转录因子结合元件基因的表达，进而导致乳腺癌的发生。通常情况下，以ER基 因表达情况的不同可将乳腺癌分为ER阴性乳腺癌和ER阳性乳腺癌两种。其中ER 阴性乳腺癌约占20％,-,35％，其恶性程度高、发展迅速、有较高的局部复发率， 并易发生肺、肝、骨及脑等重要脏器的转移，预后较差。由于缺乏相应的受体 不能进行内分泌和生物治疗，所以这类特殊乳腺癌的治疗仅限于化疗，但疗效 欠佳。因此，作为一个分子标记物，ER在乳腺癌的内分泌治疗中进行效果预测、 评估激素依赖性等方面具有重要的意义。 DNA甲基化和染色体重组是当前研究ER阴性乳腺癌中ER基因失活的两大 主要学说。甲基化在肿瘤的发生、发展中有着重要作用，但又是一可逆过程。 从理论上来说，如果使用药物对甲基化的抑癌基因和癌基因进行人为逆转，即 可使因甲基化失活的基因重新获得表达。 三氧化二砷(As203)为中药砒霜的主要成分，近年来发现其对白血病、原 摘要发性肝癌等多种肿瘤治疗取得了较好的效果。主要通过诱导细胞凋亡来发挥其 摘要 发性肝癌等多种肿瘤治疗取得了较好的效果。主要通过诱导细胞凋亡来发挥其 细胞毒性作用，如今多项研究证明其具有甲基化抑制作用。 本实验通过研究不同浓度的As203对人ER阴性乳腺癌细胞株MDA．MB-435 进行药物诱导，使其基因启动子区CpG岛部分脱甲基而使其重新表达有功能的 ERa，从而使得ER阴性乳腺癌细胞恢复对内分泌治疗药物的敏感性。 材料与方法： (1)常规培养雌激素受体(En)阴性人乳腺癌细胞株MDA．MB-435，细 胞浓度调整为5x 105／ml后换含As203的培养液，至A8203终浓度分别为0．59mol／L、 1．09mol／L、2．09mol／L、4．09mol／L，连续培养72h。以同期培养不加药的 MDA．MB．435细胞作为阴性对照，ERa阳性人乳腺癌细胞株MCF．7作为阳性对 照。 (2)RT．PCR方法检测经不同浓度As203处理后的MDA．MB-435细胞ERa的 mRNA表达情况。 (3)甲基化特异性PCR(Methylation Specific PCR，MSP)方法检测经不同 浓度As203处理后的MDA．MB-435细胞ERa DNA的5-CpG岛甲基化的情况。 (4)Western blot方法检测经不同浓度As203处理后的MDA．MB．435细胞 ERa的蛋白表达情况。 (5)免疫组化方法检测经不同浓度As203处理后的MDA．MB．435细胞ERa 的蛋白表达情况。 (6)MTT方法检测经不同浓度As203处理后的MDA．MB-435细胞，再经三 苯氧胺(TAM)处理，观察各组细胞的生长受抑情况。 (7)统计学方法：应用统计学处理软件SPSS 1 6．0，X?检验进行统计学分 析，差异显著性标准设为P0．05。 结果： (1)RT-PCR法检测阴性对照组无ERa mRNA基因