卵巢癌肝脾转移动物模型的建立及转染CD40L基因抗卵巢癌肝转移作用的体内实验分析-妇产科学专业毕业论文.docxVIP

英文摘要英文缩写 英文摘要 英文缩写 English Abbreviation 啦c Antigen Presenting Cell ANOVA analysis of variance CD40L CD40 Ligand CTL Cytotoxic T Lymphocytes DC Dendritic Cell DMSO dimethyl sulfoxide EUSA Enzyme Linked Immunosorbent Assay FCS fetal calf serum IFN-? Interferon—gamma IL．4 Interleukin．4 IL．10 Interleukin．10 IL．12 Interleukin．1 2 MTT dimethyl··thiozolyl··dipheny tetrazolium bromide NK natural killer OD Optical Density PBS phosphate buffered saline TNF．a Tumor Necrosis Factor-alpha Th T helper cell 河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。 本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。 河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学 位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材 料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则， 承担相应的法律责任。 研究生签名：文I|涛 导师签名：纭最．学院领导签名： 砩年弓月矽Et 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写， 文责自负。 研究生签名：安-j洁 导师签名：粒氛 硼年5月27 Et 中文摘要卵巢癌肝脾转移动物模型的建立及转染CD40L基因 中文摘要 卵巢癌肝脾转移动物模型的建立及转染CD40L基因 抗卵巢癌肝转移作用的体内实验研究 摘 要 目的：卵巢癌是一种常见的，死亡率极高的妇科恶性肿 瘤，目前主要采用手术、放疗、化疗相结合的治疗方法，虽 治疗手段有了较大进步，但疗效并不乐观。恶性肿瘤的发生 发展与机体的免疫功能低下有关，目前免疫基因治疗越来越 受到重视。CD40配体(CD40L)是一种免疫调节分子，CD40L 与CD40结合能有效刺激T细胞增殖分化，增强其特异性杀 伤肿瘤细胞的作用，还可诱导T细胞分泌细胞因子，从而发 挥抗肿瘤作用。本课题旨在建立小鼠肝脾转移动物模型的基 础上，探讨转染CD40L基因的卵巢癌细胞株OVHM (CD40LO删)脾脏接种后体内抗肿瘤效应的机制，为 CD40L的临床应用提供实验依据。 方法： 1用MTT法测定CD40L-OVHM细胞、OVHM细胞和 空载体DNA．pMKITneo．OVHM细胞的生长曲线，应用倒置 显微镜观察三种细胞的形态。 2用流式检测仪检测CD40L在CD40L-OVHM细胞和 OVHM细胞的表达情况。 3用HE染色法验证经小鼠脾内接种OVHM细胞建立肝 转移模型的可行性。 4经小鼠脾脏内接种肿瘤细胞建立肝转移模型分为四 组：OVHM细胞组、空载体DNA．pMKITneo．OVHM细胞组、 中文摘要CD40L．OVHM细胞组及注射PBS液组。于小鼠脾脏接种肿 中文摘要 CD40L．OVHM细胞组及注射PBS液组。于小鼠脾脏接种肿 瘤细胞后第10天用流式细胞仪分析不同组脾细胞CDllc分 子的表达情况来反映树突状细胞(DC)的数量。于小鼠脾脏 接种肿瘤细胞后第10天用MTr法检测不同组脾脏杀伤性T 细胞(CTL)的杀伤活性。于小鼠脾脏接种肿瘤细胞后第14 天用ELISA法检测不同组小鼠外周血血清中细胞因子 (IFN吖、YNF-a、IL．4、IL．10和IL-12)的含量。于小鼠脾 脏接种肿瘤细胞后第14天称量小鼠肝脏和脾脏的重量及观 察肝脏转移瘤结节的情况。最后每组余下10只小鼠用于观 察生存期。 结果： 1镜下观察OVHM细胞、CD40L-OVHM细胞和 DNA-pMKITneo．OVHM细胞三种细胞形态无明显区别，测 定三种细胞的生长增殖情况无明显差异。 2 CD40L-OVHM细胞表面大量表达CD40L分子，而 OVHM细胞未见CD40L表达。 3小鼠脾脏内接种肿瘤细胞OVHM细胞后第14天脾脏 接种局部出现原发肿瘤，肝脏表面可见大量转移瘤结节，病 理学证实小鼠肝脏和脾脏的肿瘤结节的病理学形态结构相 似，可见肝脾转移动物模型