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灵芝三萜单体化合物对鹅膏毒肽中毒小鼠
的治疗作用及其机理研究 Treatment Effects and Mechanisms of Action of Triterpenoids Monomer from Ganoderma lucidum on a-Amanitin--Induced Liver Inj ury
in Mice
指导教师姓名、职称. 医佳红数援.
湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一五年六月
万方数据
摘
摘 要
我国的食物中毒死亡事件主要是由毒蘑菇中毒引起的。作为有效 的解毒剂,灵芝煎剂已在临床上用于治疗鹅膏菌引起的中毒。作为灵 芝的主要药效成分之一,灵芝三萜被证实具有多种药理作用。本文探 讨了5种灵芝三萜单体化合物、灵芝总三萜(GLTT)和对照药物水 飞蓟宾对泓鹅膏毒肽(a-AMA)中毒小鼠的治疗作用及其机理,获得了 以下结果:
1.灵芝总三萜的提取、分离纯化:以灵芝子实体粉末:无水乙醇
=1:20的比例,80‘C水浴浸提4个小时,重复该过程3次,得粗提液, 浓缩后得浸膏,经大孔吸附树脂(AB一8)吸附后梯度洗脱(首先用 水洗,待流出液无色后,70%、90%乙醇梯度洗脱),收集洗脱液浓 缩后冻干,得粗提物,萃取后,以不同比例(98:2、96:4、94:6、92:8、 90:10)的氯仿、甲醇为洗脱剂过硅胶柱继续分离纯化,收集氯仿: 甲醇=98:2组分,浓缩,冷冻干燥后得到纯度98%左右的灵芝总三
萜(GElT),经HPLC分析表明至少含有18种以上的灵芝三萜单体化 合物,其中含有灵芝酸A、B、G和灵芝烯酸B。
2.灵芝三萜单体化合物及灵芝总三萜的体外抗氧化活性:分别 采用DPPH自由基清除活性的测定、铁离子螯合能力测定、还原力测 定3种方法检测了5种灵芝酸和灵芝总三萜的抗氧化活性,结果表明 各物质均具有较强的抗氧化能力,其中灵芝酸C2的抗氧化能力最强,
万方数据
灵芝酸A的抗氧化能力最弱。
灵芝酸A的抗氧化能力最弱。 3.灵芝三萜单体对a.鹅膏毒肽中毒小鼠的治疗作用:与正常组相
比,中毒小鼠血清中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转 移酶(AST)活性显著升高,引起严重肝损伤。经灵芝三萜单体、灵 芝总三萜和水飞蓟宾治疗后,ALT、AST的活性显著性降低,表明5 种灵芝三萜单体化合物和灵芝总三萜具有水飞蓟一样的治疗效果;不 同剂量(5-40mg/kg/day)的灵芝酸C2均能明显的降低中毒小鼠的血 清川-一T、AST活性,并且具有剂量正相关性,剂量为20 mg/kg/day
时治疗效果最显著;灵芝总三萜、灵芝三萜单体和水飞蓟宾治疗后能 降低致死剂量下中毒小鼠死亡率20—40%。
4.灵芝三萜单体对洳鹅膏毒肽中毒小鼠抗氧化活性的影响:a.鹅 膏毒肽中毒处理后,小鼠肝脏匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)以及过
氧化氢酶(CAT)的活性明显降低,而丙二醛(ⅧA)的含量显著
的升高。灵芝三萜单体、灵芝总三萜和水飞蓟宾治疗后,能显著的增 加中毒小鼠的SOD和CAT酶活性,并显著降低MDA的含量。不同 剂量(5-40mg/kg/day)的灵芝酸C2均能大大增加中毒小鼠肝组织内
的SOD和CAT酶活性,并显著降低MDA的含量,并且具有剂量正 相关性,剂量为20 mg/kg/day时效果最显著;这些结果表明灵芝三萜 具有治疗作用的机理之一是其具有抗氧化活性,能清除氧自由基,减 少脂质的过氧化。
5.灵芝三萜单体对洳鹅膏毒肽中毒小鼠细胞凋亡的影响:舡鹅膏 毒肽中毒小鼠的肝组织的DNA琼脂糖凝胶电泳结果可以观察到明显
万方数据
的DNA梯形带,而不同剂量(5,10,20,40mg/kg/day)灵芝酸C2
的DNA梯形带,而不同剂量(5,10,20,40mg/kg/day)灵芝酸C2 给药组没有出现明显的DNA梯形带。a.鹅膏毒肽中毒小鼠肝组织中 caspase.3,8,9活性明显升高,不同剂量灵芝酸C2治疗后,能显著
降低caspase一3,8,9的活性,20 mg/kg/day剂量下其活性最低。这些 结果说明洳鹅膏毒肽诱导了小鼠的肝细胞凋亡,而灵芝酸C2能够抑 制a-AMA引起的肝细胞凋亡。
综上所述,灵芝三萜类化合物对鹅膏毒肽所引起的肝损伤具有很 好的治疗作用,其治疗作用的机理与灵芝三萜具有抗氧化活性、自由 基清除能力以及具有对细胞凋亡的抑制作用有关。
关键词:灵芝三萜,0【.鹅膏毒肽,肝损伤,抗氧化,细胞凋亡
Ill
万方数据
ABSTRACTPoisonous
ABSTRACT
Poisonous mushrooms were the main cause of food poisoning related deaths in our co
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