分月扇舟蛾几丁质酶dsRNA转化杨树及其抗虫性的研究.pdf

目录 2．4．2分月扇舟蛾几丁质酶基因cDNA序列的扩增………………………………………．13 2．4．3分月扇舟蛾几丁质酶基因的序列分析………………………………………………．．13 2．4．4分月扇舟蛾几丁质酶基因的生物信息学分析………………………………………一14 2．5关于分月扇舟蛾的几丁质酶基因家族的讨论…………………………………………．20 2．6本章小结…………………………………………………………………………………．20 3分月扇舟蛾几丁质酶基因dsRNA载体构建及杨树转化………………………………．．2l 3．1试验材料…………………………………………………………………………………．2l 3．1．1供试虫体，菌株………………………………………………………………………．．21 3．1．2供试试剂………………………………………………………………………………．．21 3．1．3仪器设备………………………………………………………………………………．．21 1 3．1．4有关试剂的配制………………………………………………………………………．．2 3．1．5有关培养基的配置……………………………………………………………………．．22 3．2试验方法…………………………………………………………………………………．23 3．2．1几丁质酶基因I斟Ai载体构建策略…………………………………………………．．23 3．2．2分月扇舟蛾总DNA的提取……………………………………………………………25 3．2．3目的基因的获得………………………………………………………………………一25 3．2．4植物表达载体的构建…………………………………………………………………．．27 3．2．5 RNAi载体转化农杆菌…………………………………………………………………28 3_2．6重组载体的鉴定………………………………………………………………………一28 3．2-7抗生素的筛选…………………………………………………………………………．．29 3．2-9转基因杨树的PCR检测………………………………………………………………30 3．3结果与讨论………………………………………………………………………………．34 3．3．1分月扇舟蛾基因组DNA的提取………………………………………………………34 3．3_2目的片段的扩增………………………………………………………………………．．35 3．3．4 3．3．5 3．3．6卡那霉素，头孢霉素筛选浓度的测定………………………………………………．．38 3．3．7根癌农杆菌转化山新杨………………………………………………………………一41 3．3．8转基因杨树总RNA的提取……………………………………………………………42 3．3．9分月扇舟蛾的几丁质酶RNA片段在转基因杨树中的表达量………………………43 3．4关于几丁质酶基因dsRNA转山新杨的讨论……………………………………………43 3．4．1杨树品种的确定………………………………………………………………………．．43 3．4．2构建载体的内含子的确定……………………………………………………………．．44 万方数据 目录 3．4．3目标基因片段的选择…………………………………………………………………．．44 3．4．4关于抗生素筛选………………………………………………………………………．．44 3．5本章小结…………………………………………………………………………………．44 4转基因植株的抗虫性研究…………………………………………………………………46 4．1实验材料…………………………………………………………………………………．46 4．1．1供试树种………………………………………………………………………………．．46 4．1．2供试昆虫………………………………………………………………………………．．46 4．2实验方法…………………………………………………………………………………．46 4．3结果与讨论………………………………………………………………………………．47 4．3．1分月扇舟蛾总RNA的提取……………………………………………………………47