冷适应过程中柑桔钙信号变化的研究-果树学专业论文.docxVIP

缩略词表缩略符号 缩略词表 缩略符号 中文解释 Probenecid 阴离子转运抑制剂 F．127 非离子去污剂 Ca-green／AM 一种酯形式的特异钙离子荧光染料 Ftuo．3|∞讽 一种酯形式的特异钙离子荧光染料 Fluo-4／AM 一种酯形式的特异钙离子荧光染料 LSCM 激光扫描共聚焦显微镜 BSA 牛血清白蛋白 CaM 钙调素 EM 电子显微镜 [Ca?+]川 胞质游离钙离子浓度 dT／dt 温度随时间的变化 EGTA 特异性钙离子螯合剂 冷适应过程中柑橘钙信号变化的研究摘 冷适应过程中柑橘钙信号变化的研究 摘 要 柑橘是世界上重要的经济作物，办是我国南方的一种极为重要的果树。探讨柑 橘抗逆性的生理生化机理，进而提出抗性栽培的技术措施，增强抵御自然灾害的能 力，是提高我国柑橘产量、品质和经济效益的关键，具有重大的意义。Ca2+作为第 二信使在生物体内起着重要作用。而cal十信号对植物抗寒的作用大多数只是在一年 生草本植物上得到研究．而在多年生木本植物的研究上甚少。本研究以较抗寒的柑 橘枳壳(Poncitrus trifoliata)和抗寒性较弱的桠柑(Citrus reticulate Blanco)幼叶为材 料．用焦锑酸钙沉淀法对钙进行组织定位：以来檬fC aurat(folia Swingle)原生质体为 材料，用LSCM观测低温下钙定位和游离钙浓度变化。 1．在对槿柑(Creticulate Blanco．)和枳壳(户护帕liata R锄叶片钙的亚细胞定位的实验 中，25℃下生长的幼苗，显示钙定位的焦锑酸钙沉淀主要分布于液泡、细胞间隙和 细胞壁中，而在胞质和叶绿体中分布较少，叶片在开始低温锻炼(4C)培养2h内， 细胞质、叶绿体的钙水平都升高，叶绿体中钙分布在片层结构上，而液泡中的钙水 平迅速降低。但在低温锻炼时间延长到48h后，细胞内的细胞质、叶绿体的钙水平 降低。在4℃低温下锻炼7d，细胞内钙又恢复到低温处理前的水平。 2．用Fluo--4／AM染色，测定静息态及连续降温条件下来檬(C．auratifolia Swingle)原 生质体游离ca2+浓度的时空分布与动态变化。实验采用三种溶液系统：51．tmol／L的 A二3187染色液，2mmol／L EGTA的染色液．对照染色液。结果表明，对照染色液中温 育的原生质体在LSCM下观察到，荧光位于细胞质内，在液泡中没有渗漏。A23Is7作 为ca2+载体，它可把钙从胞内钙库转移至细胞溶质中去提高了细胞溶质中游离C一+ 的浓度。EGTA是特异性Ca2+螯合剂。经EGTA反应过的细胞内仅有微弱的荧光。 所以可以说明我们的实验体系确实能够反映Ca2+的变化．还从另～侧面说明了荧光 是Fluo--4与游离ca》是特异性结合产生的。同时，其静息态下游离ca}浓度水平是 细胞对外界刺激作出回应及回应强弱的基础。连续缓慢的降温条件下，来檬【ca2+]。。 动态变化表现不明显；而在很短的时间内从15℃降低至约4℃时．来檬原生质体出 现游离Ca2十浓度升高，之后在持续4℃的低温下，Ca2+的浓度没有进一步升高；推测 植物在低温下产生冷适应的能力。 总结以上结果，表明柑橘细胞内Ca’对不同的低温刺激会表现出不同反应，进一 步为“Ca+是低温下生理信号的转导者”这一假说提供了新的证据。 关键词：柑橘，焦锑酸钙沉淀，荧光分析，C a_”浓度时空变化，冷适应 Calcium Calcium signal change in cold—acclimating citrus Abstract Citrus is one of the most important economical crops in southern China as well aS in the world．Environmental stresses，including cold injury,cost great economic losses in the most of the citrus product region in the world，So，it is a great challenge for us to know more about the mechanism for citrus in response to the environmental stress．Calcium play a key role in hard resistance of biology,and has been recognized widely as the second message in the plant sigIlal system．But how and when does calci