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微生物学实验操作考核试题及评分标准
实验一:
消毒、灭菌、无菌操作及实验室注意事项
步骤
考核目标及评分细则
满分值
一
浏览整个实验目的、原理和操作步骤。
二
选择仪器、药品和培养基:
培养皿(2包),试管、吸管、自动式高压蒸汽灭菌锅、紫外线灯、注射器,微孔滤膜(0.22μm),镊子和玻璃涂棒等。
蒸馏水、无水乙醇、大肠杆菌菌种培养斜面,牛肉膏蛋白胨培养基/LB培养基等。
10分
三
进行实验:
1、采用紫外线灭菌法,插上电源,掌握无菌操作台的按钮各个功能,进行无菌操作室、无菌操作台灭菌,灭菌30分钟。(10分)
2、进行培养皿、枪头等包扎,掌握干热灭菌、高压蒸汽灭菌操作方法。(10分)
3、掌握过滤灭菌的方法,正确使用过滤器、滤膜的操作步骤(吸液、安装、过滤)。(10分)
4、无菌操作技术
(1)固体培养基加热溶化。(10分)
(2)70%的酒精擦洗操作台面,无菌操作台倒平板。(10分)
(3)无菌操作台接种大肠杆菌进行四分法划线。(10分)
(4)划线的培养基进行37℃培养。(10
70分
五
根据实验现象得出结论:
掌握干燥灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外灭菌、过滤灭菌的操作方法,观察无菌操作的接种划线的效果,有无单个菌落出现。
10分
六
实验后整理:
无菌操作台、无菌操作室进行清理。洗涤仪器并使其归位。保持台面和地面整洁,实验后洗手。
10分
实验二:
培养基制备
步骤
考核目标及评分细则
满分值
一
浏览整个实验目的、原理和操作步骤。
二
实验需要的仪器和药品
试管、三角烧瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、自动式高压灭菌锅、封口膜、记号笔、皮筋、pH试纸等。
牛肉膏蛋白胨培养基、LB培养基、高氏一号培养基、马丁氏培养基的所需药品。
10分
三
设计实验步骤:
1、LB培养基制备
操作步骤如称量、调pH、液体分装、加琼脂、封口膜封口,包扎、标记、灭菌。(10分)
2、牛肉膏蛋白胨培养基制备
操作步骤如称量、调pH、液体分装、加琼脂、封口膜封口,包扎、标记、灭菌。(20分)
3、高氏一号培养基制备
操作步骤如称量、调pH、液体分装、加琼脂、封口膜封口,包扎、标记、灭菌。(20分)
4、马丁氏培养基制备
操作步骤如称量、加入孟加拉红溶液、液体分装、加琼脂、封口膜封口,包扎、标记、灭菌。(20分)
70分
四
得出结论:
掌握四种培养基配制方法,使其成为固体培养基,成无菌状态。
10分
五
实验后整理:
无菌操作台、无菌操作室进行清理。洗涤仪器并使其归位。保持台面和地面整洁,实验后洗手。
10分
实验三:
实验室和人体表面微生物的检查
步骤
考核目标及评分细则
满分值
一
浏览整个实验目的、原理和操作步骤。
二
实验需要的仪器和药品
酒精灯、灭菌牙签和棉签、无菌水、灭菌培养皿等。
牛肉膏蛋白胨培养基、LB培养基。
10分
三
设计实验步骤:
1、倒平板
培养基加热溶化,无菌操作台倒平板,使其凝固待用。(10分)
2、标记
分别在2套平板的底部划分出4个小区,并在其边缘写上名字和日期,在4个小区内分别标明待接种的样品名。在另2套平板的底部标记名字、日期及空气1和空气2。(20分)
3、人体表面微生物的检查
用手指表面(洗手前后)、头发、鼻腔、门把手、灰尘、操作台等处进行轻接,盖上皿盖。(20分)
4、实验室环境的检查
两个标记有“空气1”、“空气2”的平板,分别放置无菌空气、空气中静置1h。(10分)
5、培养
将所有平板翻转,倒放置37℃培养1-2d。(10
70分
四
得出结论:
掌握实验室和人体表面微生物菌落数量、类型,了解微生物无处不在。
10分
五
实验后整理:
无菌操作台、无菌操作室进行清理,擦洗。所用的培养基的三角瓶、洗涤仪器并使其归位。保持台面和地面整洁,实验后洗手。
10分
实验四:
活菌计数法和显微镜直接计数
步骤
考核目标及评分细则
满分值
一
浏览整个实验目的、原理和操作步骤。
二
实验需要的仪器和药品
显微镜、血细胞计数板、凹载玻片、盖玻片、擦镜纸、软布、接种环、毛细滴管、度管、脱脂棉和三角烧瓶等。
香柏油、二甲苯、生理盐水和凡士林等。
酿酒酵母、米曲霉、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌等。
10分
三
设计实验步骤:
1、显微镜计数
(1)菌悬液制备:5ml的无菌生理盐水加到酿酒酵母或米曲霉培养斜面上,用无菌环来回刮取,倒入盛有5ml生理盐水和玻璃珠的三角烧形中,充分振荡使细胞分散。(10分)
(2)检查血细胞计数板:95%的乙醇棉球轻轻擦洗,用吸水纸吸干或用电吹风吹干。(10分)
(3)加样品:再用无菌的毛细滴管吸入一小滴菌悬液,进入计数室,静置5min,进行观察。(5分)
(4)显微镜计数:进行计算。(5分)
(5)清洗:将血细胞计数板及盖玻片进行清洗。(5分)
2、悬滴法观察
(1)制备菌悬液:制成轻
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