两个新型Rab蛋白的分子克隆和生物学功能研究-免疫学专业论文.docxVIP

序言三年的生活一转眼就过去了，回首过去，有一些什么样的感受呢?止，而后能观。 序言 三年的生活一转眼就过去了，回首过去，有一些什么样的感受呢?止，而后能观。 现在也许是一个好时机停下来，想一想过去，筹划一下未来。 总体来说，L!--年绝对是惨淡的三年，我没有任何的奢侈和享受；这三年又是难 忘的三年，也是成长和有所收获的三年。雨果说过(李楠语)，最难忘的日子不是那 些奢侈淫靡的日子，而是那些真正的狗日子(大意如是)。这样的日子里，有时感觉 ‘ 是寂寞的；然而有时却是振奋人心的。当你在听到一天里第一声清脆的鸟鸣时，当 你在看到第一缕阳光时，当你遇见一个在晨曦中慢跑的花甲老人时，那种内心深处 的震撼和感叹是多么的微妙和美好。然而不幸的是，我是一个贪婪的人，我的愉悦 似乎是越来越难以达成。最初当我在黑暗中看到闪闪发光的印迹结果时，传遍全身 的惊喜和快乐曾经使我难以平息。但是我已经不能对这样的事情再次感到幸福和满 足了。在这种对于惊喜的寻找中，我度过了三年的时光。这是不是就是生活的全部 呢?应该不是这样。生活的内涵应该更为宽广，不然怎会有那么多的诗人对此各抒 己见呢，怎么会被许多人冠以各种形容词和名词呢?生活是什么?我也讲不清楚， 但是我隐隐感至0生活决不仅仅是这些，绝对不是。 奶牛是伟大的，因为它吃进去的是草，挤出来的却是奶。我的收获时间就要到了， 我所产出的是不是奶呢?这要留待别人来评价。但是我清楚地感觉到，在追求智慧 的里程中永远是山外有山，在科学的海洋里，我永远是沧海一粟。 英文缩写DC 英文缩写 DC 树突状细胞 GM——CSF 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 I L一4 白细胞介素4 GST 谷胱甘肽巯基转移酶 I PTG 异丙基硫代一0一D半乳糖苷 GTP 三磷酸鸟苷 GDP 二磷酸鸟苷 C 免疫组织化学 HSP 热休克蛋白 Hsc70 天然表达的热休克蛋白70 ER 内质网 T6N 反面高耳尔复合体 FI TC—OVA 异硫氰酸荧光素标记的卯白蛋白 、贸上篇睾丸功能相关hRabJ，lnRabJ全长新基因的分子克隆与 、贸 上篇睾丸功能相关hRabJ，lnRabJ全长新基因的分子克隆与 生物学功能研究． ／ 中文摘要 } f ＼树突状细胞(Dendritic cells．DC)是近年来免疫学的研究热点之一t从中 寻找新分子不仅有助于了解抗原提呈过程及免疫调节机制，而且可能有利于某些生 物学机制的探讨。对cDNA文库的随机测序可以获得新的分子，同时对这些新分 子的进一步功能研究将促进人们对某些生命现象的重新认识。本文所研究的hRabJ (human Rab Drotein with J domain)是从人DC的cDNA文库中发现的Rab家族的 新分子；而在此讨论的mRabJ(mouse Rab protein with J domain)贝0是以小鼠睾丸 cDNA为模板克隆得到的hRabJ的小鼠同源物，与hRabJ在序列及生物学功能上具 有极大的相似性。Rab蛋白是一类属于Ras超家族的小分子量GTP结合蛋白，自 身具有微弱的GTP酶活性，分子量在22--25KD之间。目前认为，通过GTP与GDP 的开关转换作用发挥介导囊泡锚着与融合的功能，因此，对于蛋白的内吞和外吐等 蛋白转运过程发挥重要的调控功能。新的Rab分子的发现，必将有助于蛋白转运 这一重要生物学现象的研究。 RabJ的EST是在对人DC cDNA文库中大规模测序中发现的，然后通过5’ RACE获得了全长基因的编码序列。利用DC的反转录产物为模板，我们克隆了RabJ 的全长cDNA(已经在GenBank登录，基因登录号为AFl78983)，并将其用于以 后的载体克隆。hRabJ cDNA全长1787bp，开放阅读框822bp，编码273个氨基酸 的蛋白质。同源搜索提示其含有两类蛋白的特征性功能域。在其氨基端含有三个磷 酸／镁离子结合基序和三个鸟苷酸结合功能域，是Rab蛋白家族分子结合GTP及发 挥GTP酶活性的保守结构：羧基端含一个70氨基酸残基的J功能域，并且含有保 守的与Hsp70家族分子相互作用有关的HPD序列。因此，我们命名其为hRabJ (human Rab protein with J domain)。人类组织Northem印迹发现hRabJ优势表达于 睾丸组织，在卵巢和大脑中仅有极少量的表达，提示其可能参与生殖过程；在多种 细胞系内我们检测到了hRabJ RNA的少量表达。RT--PCR提示hRabJ广泛低水平 表达于多种常见T淋巴细胞、B淋巴细胞及单核巨噬细胞系。由于hRabJ在睾丸组 织内的高表达，我们用小鼠睾丸反转录产物为模板，以hRabJ的两端引物为引物， 克隆得到了hRabJ的小鼠同源物，我们将其命名为mRabJ(mouse Rab pro