磷脂酶D生产菌的筛选及其基于16SrDNA的进化研究-粮食、油脂及植物蛋白工程专业论文.docxVIP

学位论文数据集中图分类号 学位论文数据集 中图分类号 Q939．9 学科分类号 180．6150 论文编号 10010201112 30 密 级 公开 学位授予单位代码 l0010 学位授予单位名称 北京化工大学 作者姓名 范懿 学 号 2008001230 粮食、油脂及植物蛋 获学位专业名称 获学位专业代码 08320l 白工程 课题来源 自选 研究方向 微生物选育 论文题目 磷脂酶D生产菌的筛选及其基于16S rDNA的进化研究 关键词 磷脂酶D，磷脂，转酯反应，进化分析 论文答辩日期 2011．05．23 ·论文类型 开发研究 学位论文评阒及答辩委员会情况 姓名 职称 工作单位 学科专长 指导教师 袁其朋 教授 北京化工大学 生物化工 评阅人1 于慧敏 副教授 清华大学化工系 生物化工 评阅人2 梁浩 副教授 北京化工大学 生物化工 评阅人3 评阅人4 评阅人5 撇员蝴 陈劲春 教授 北京化工大学 生物化工 答辩委员1 王雅琴 副教授 北京化工大学 生物化工 答辩委员2 郑国钧 教授 北京化工大学 药物合成 答辩委员3 杨晶 副教授 北京化工大学 生物材料 答辩委员4 赵会英 副教授 北京化工大学 药物制剂 答辩委员5 注：一．论文类型：1．基础研究2．应用研究3．开发研究4．其它 二．中图分类号在《(中国图书资料分类法》查询。 三．学科分类号在中华人民共和国国家标准(GB／T 1 3745—9)《学科分类与代码》中 查询。 四．论文编号由单位代码和年份及学号的后四位组成． 磷脂酶D(PLD：EC 磷脂酶D(PLD：EC 3．1．4．4)可催化磷脂水解为磷脂酸，同时还可 催化自然界中含量丰富的磷脂酸胆碱转酯为自然界中含量稀少甚至不存 在的磷脂或磷脂衍生物。该转酯反应对于合成稀有天然磷脂组分及人工合 成磷脂具有不可替代的优势。到目前为止，不少生产PLD的菌株已经被 成功分离出来。但对于工业化生产来讲，获取更多性能稳定的酶源是必要 的。 本文从北京昌平美亚斯磷脂厂园区土壤内筛选出了5个生产PLD 的放线菌(HF．O，HF．2，HF．9，HF．23和HF．36)。5株菌所产PLD均表 现出了不同的水解及转酯活性。其中，HF一23所产PLD表现出了最高的 水解活性(6．8 U／mg)和最好的从磷脂酰胆碱转化为磷脂酰丝氨酸的转 酯特性。此结果表明，HF．23具有良好的产酶性能，转酯活性较强，拥 有制备高纯度磷脂酰丝氨酸的商业应用价值。另外，通过在反应体系中添 加Ca2+可确定，Ca2+对于同时具有水解和转酯活性的PLD酶具有双重 影响，可降低转酯活性而提高水解活性，对只具有水解活性不表现转酯活 性的PLD酶则无影响。 经过对形态学、生理生化反应特征的观察，再结合16S rDNA序列 比对确定本文所筛5个菌株同为链霉菌属。以本文所分离5个菌株和前 人所报道的PLD生产菌株的16S rDNA为基础构建进化树，可见进化 树中所包含的菌株主要分成了两个类群(HF．23位于类群I而本文其他 I 北京化工人学硕Ij学位论文 四个菌株位于类群II)。与此同时，大多已知的具有高催化活性的PLD的 生产菌都属于类群I，表明类群I所包含的菌株倾向于生产结构较为保 守，活性较为稳定的PLD。 关键词：磷脂酶D，磷脂，转酯反应，进化分析 Ⅱ ABSTRACTISOLATIoN ABSTRACT ISOLATIoN oF PHoSPHoLIPASE D PRoDUCING STRAINS AND THEIR EVOLUTIoN BASED oN 1 6S rDNA SEQUENCE ANALYSIS ABSTRACT Phosph01ipase D (PLD； EC 3．1．4．4) catalyzes the hydrolysis of phospholipids to phosphatidic acids(PA)as well as transphosphatidylation of the naturally a_bundant phosphatidylcholine to a la唱e group of natural or unnatural phospholipids． The tIIansphosphatidylation reaction is an indispensable tool fo