雷公藤多苷联合人参皂苷对巨噬细胞移动抑制因子诱导大鼠成纤维样滑膜细胞增殖及RANKLOPG表达的影响-中西医结合临床专业论文.docxVIP

黝世㈣㈣脚Y1 黝世㈣㈣脚 Y1 9dd岑芝d’ 目 录 中文摘要 ”1 英文摘要 ·5 研究论文雷公藤多苷联合人参皂苷对巨噬细胞移动抑制因子诱导大鼠成 纤维样滑膜细胞增殖及黜悄Ⅺ．一／OPG表达的影响 前言刖舌 ”y”9 材料与方法 lO 结果 ·1 5 附图 ·19 附表 2l 讨论 ·23 结论 ·28 参考文献 30 综述成纤维样滑膜细胞在类风湿关节炎中的研究 ··35 致谢 5 1 个人简历 52 中文摘要人参皂苷对巨噬细胞移动抑制因子诱导大鼠成 中文摘要 人参皂苷对巨噬细胞移动抑制因子诱导大鼠成 纤维样滑膜细胞增殖及RANKL／0PG表达的影响 摘 要 目的：类风湿关节炎(rheumatoid甜llritis，RA)是以滑膜组织过度 增生和软骨、骨破坏为特征的疾病。目前证实对RA骨质破坏具有治疗作 用的药物是改善病情抗风湿性药物(disease modi研ng antirheumatic dmg， DMAI①s)，但该类药物的有效性有限，且毒副作用明显。成纤维样滑膜 细胞(肋roblast．1ike synoviocytes，FLS)是滑膜炎中组织损伤和基质重塑 的直接效应细胞。本研究拟通过体外培养大鼠FLS，给予重组小鼠巨噬细 胞移动抑制因子(mcombinant mouse macrophage migration i1111ibito秽 factor，mlMIF)、雷公藤多苷(％pterygium glycoside，TG)、人参皂苷 (ginsenoside，GS)进行干预，观察大鼠FLS增殖情况，检测与骨破坏 相关的细胞因子：细胞核因子一KB受体活化因子配体(rec印tor activator of nuclear factor kappaB ligand，凡ⅢKL)、骨保护素(osteoproteg耐n，OPG)、 肿瘤坏死因子．a(tumornecrosis factor．a，n师．伐)、白介素．1(interleul(in一1， IL．1)的表达，从而观察砌MIF对大鼠FLS增殖及产生骨破坏相关因子 的影响，观察中药有效成分TG、GS及其配伍对m1MIF诱导的大鼠FLS 增殖及其表达骨破坏相关因子的抑制效应，并探讨其机制。 方法： l取大鼠FLS细胞株RSC．364，常规复苏，培养，传代，实验用3—5代 滑膜细胞。 2实验分组如下：空白对照组、MIF组、MIF+GS组、MIF+TG组、 MIF+TG+GS组、MIF+甲氨蝶呤(Metho仃exate，MTX)组。 3通过MTT法所测OD值判断药物对FLS增殖的影响。 4免疫组织化学染色法分别检测大鼠FLS上OPG、黜州KL的表达，并 进行半定量分析。 5收集上清液，然后用ELISA方法检测OPG、黜ⅢKL含量；用放射免 疫方法检测TNF．扒IL．1p含量。 6所有数据均采用SPSS for windows 1 3．O软件包进行统计学处理。实验 中文摘要 中文摘要 结果用均数士标准差(；姆)表示。组间差异采用单因素方差分析(one．way ANOVA)，组间两两比较采用LSD法，氏O．05认为有统计学意义。 结果： 1彻MIF对大鼠FLS增殖及表达骨破坏相关因子的影响 1．1 mIMIF对大鼠FLS增殖的影响 mIMIF可促进大鼠FLS增殖：与空白对照组OD值相比，MIF组均 数较高，有统计学意义(卢O．004)。 1．2砌IMIF对大鼠FLS表达OPG的影响 未显示出m1MIF对大鼠FLS表达OPG的影响：空白对照组与MIF 组的细胞OPG标记指数无统计学差异(脚．117)；经完全随机方差分析， 各组上清液OPG浓度无统计学差异(卢O．400)。 1．3 m蝴IF对大鼠FLS表达RANKI，的影响 mMIF可促进大鼠FLS表达凡ⅢKL：与空白对照组的细胞RANKI， 标记指数相比，MIF组均数较高，有统计学意义(pO．044)；与空白组相 比，MIF组上清液中毗ⅢKL浓度显著增高，有统计学意义(卢O．001)。 1．4 mMIF对大鼠FLS表达凡蝌Ⅺ√OPG比值的影响 mlMIF可促使大鼠FLS培养上清液中砒ⅢⅪL／OPG值升高：与空白 对照组相比，MIF组的砒蝌Ⅺ√OPG值较高，有统计学意义(芦O．001)。 1．5 mMIF对大鼠FLS表达n盯．仅的影响 未显示出彻MIF对大鼠FLS表达TNF．a的影响：空白对照组和MIF 组上清液中TNF．0【浓度无统计学差异(P=O．408)。 1．6 mlMIF对大鼠FLS表达IL-1B的影响 未显示出舢MIF对大鼠FLS表达IL．1p的影响：经完全随机方差分 析，各组上清液OPG浓度无统计学差异(卢O．549)。 2 TG和GS对砌MIF诱导大鼠FLS