病原生物学跟免疫学实验资料.pptVIP

病原生物学与免疫学实验 病原生物学与免疫学教研室 2004年2月 病原生物学与免疫学实验室规则 微生物学实验室是进行微生物培养鉴定及试验的场所，是一个微生物高度集中的区域，为了防止微生物感染人体及扩散，保证安全及每次实验结果的准确性，要求同学遵守下列规则： 一般注意事项 进实验室穿上实习衣，离室时脱下，要反折，并经常进清洗。 书包、衣物等勿带入实验室，必要的文具、实验指导，笔记等带入后，也要远离操作部位。 实验室内要保持安静，有秩序，不得高声谈笑，或随便走动以免影响他人实验。 实验室内禁止饮食、吸烟和用嘴湿润铅笔或标签等，也不要以手抚摸头部等部位。 做练习要保持无菌操作操作。以防止临床标本及纯培养物的污染， 吸过菌液的吸管、毛细吸管，要投入含有2～3％来苏儿或0.1％新洁而灭液的玻璃筒中，其它带菌材料放在指定地点，以防止微生物污染环境。 若发生吸入菌液，割破手指等事故，应立即报告老师，进行预防处理。 爱护公物，节约使用实验材料、器材，如损坏公物，应立即向指导教师报告，登记处理。 实验完毕，应及时清理实验室，做好卫生，关好门、窗、水笼头、电灯。 离开实验室前，应在消毒液中将手浸泡5～10分钟，再用清水洗净。 发生意外事故的处理 皮肤破伤：用生理盐水洗净后，涂以2％红汞或2％碘酒。 烧伤：涂以凡士林油，5％鞣酸或2％苦味酸。 化学药品腐蚀伤：若为强酸，先用大量清水冲洗，再以5％碳酸氢钠或5％氢氧化铵溶液中和之；强碱腐蚀则先以大量清水冲洗后，再以5％醋酸或5％硼酸洗涤中和。 吸入病原菌菌液：应立即吐人容器内消毒，并用1∶1000高锰酸钾溶液或3％双氧水漱口。 菌液流洒桌面，倾倒适量消毒液于污染面浸泡半小时后抹去，再以清水擦洗干净。 严防火灾：试验完毕立即关闭电闸，煤气阀门，如系酒精，乙醚、汽油等火种，切忌用水，可撒泼大量沙土等扑灭火苗。 实验一 细菌的形态学 第一周 实验内容 普通光学显微镜的使用 细菌基本形态和特殊结构的观察 细菌标本染色检查法 （革兰氏染色法） 细菌动力检查法 （悬滴法、压滴法） 目的要求 了解细菌的基本形态及其特殊结构。 基本掌握显微镜的使用和保养。 掌握接种环的使用及菌液的采取法。 掌握细菌涂片的制备及革兰氏染色方法。 熟悉细菌动力检查法。 一、普通光学显微镜的使用 显微镜的构造图 显微镜的使用方法 油镜头的辨认 显微镜的维护 油镜加香柏油的原理 玻璃折射率： n=1.52 香柏油折射率： n=1.515 二、细菌基本形态和特殊结构的观察 使用显微镜的油镜观察各示教片，比较各菌的形态、大小、排列等；注意芽胞在菌体上的位置、大小；鞭毛形态、数最及其位置；荚膜的大小及其与菌体的关系，将观察结果画在实验报告上。 1.细菌的三种基本形态（示教） 球菌：链球菌、葡萄球菌。 杆菌：大肠杆菌。 螺形菌：霍乱弧菌。 上述示教镜各一台/每室 弧菌 2.细菌的特殊结构观察（示教） 芽胞示教片：破伤风杆菌。 鞭毛示教片：变形杆菌。 荚膜示教片：肺炎双球菌。 上述示教镜各一台/每室 三、细菌标本染色检查法 常采用美蓝，结晶紫等碱性染料进行染色。多数染料都是中性有机盐。据着色基的不同可分为以下类型： 碱性染料（basic dye）—带正电染料。其阳离子部分为发色基团，可与细胞中带负电的组分结合。 酸性染料（Acid dye）—带负电染料。其阴离子部分为发色基团，可与细胞中带正电的组分结合。 （一）细菌涂片的制备 一般制备涂片包括涂片、干燥、固定三步。 涂片 干燥 固定 固定的目的： 使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。 多种标本涂片标记示意图 如多种标本，可用蜡笔在玻片上划为数格，并于玻片的背面，标明标本的编号。 ㈡革兰氏染色法（Gram Stain）  初染：滴加结晶紫染液于涂片上，染1分钟，水洗，甩干。 媒染：加卢戈氏碘液，1分钟后水洗，甩干。 脱色：加95％酒精数滴于涂片上，频频摇3～5秒后，斜持玻片，使酒精流去，再加酒精。如此重复2～3次，直至流下的酒精无色或稍呈淡紫色时为止（约30秒钟）。水洗，甩干。 复染：以稀释石炭酸复红染液复染1分钟后，水洗，待干或用吸水纸印干，油镜镜检。 【结果】 细菌被染成紫色者，称为革兰氏阳性菌； 而细菌染成红色者，称为革兰氏阴性菌； 【意义】 鉴别细菌，用本法染色可将细菌分成两大类。