亮菌发酵工艺、亮菌多糖及药效学研究-微生物学专业论文.docxVIP

四川大学硕上学位论文亮菌发酵工艺、亮菌多糖及药效学研究 四川大学硕上学位论文 亮菌发酵工艺、亮菌多糖及药效学研究 微生物学专业 研究生：高婷 指导老师：孙启玲 本论文以一株假蜜环菌Inrmillariella tabescens(Scop．exFt．)Sing]作为生产 菌株进行研究，研究内容包括：(1)亮菌固态发酵、液体深层发酵工艺的初步 研究：(2)亮菌多糖的提取纯化工艺研究及简单结构分析；(3)亮菌多糖药效 学研究。主要研究结果如下： 1．亮菌固态发酵工艺研究结果：以生长状态和多糖含量为指标确定了固态发酵 的最佳培养时间为45d左右；同时通过对发酵生长期间各种酶的酶活测定， 对其生长代谢规律及生长状态进行了初步了解。这种发酵系统具有发酵周 期长的特点，有利于多种药用有效成分的合成，但同时也是固体发酵的缺 点，而且固体发酵容易染菌，产量低，不利于活性物质的提取和大规模生 产。 2．亮菌液体发酵工艺研究结果：采用“复杂系统调控技术”确定亮菌发酵的最 适因素及其相应量值。其最优发酵正艺条件为：葡萄糖：2．2％、土豆汁18 ％、麸皮汁8％、酵母粉3％、氯化铵0．27％、磷酸二氢钾0．06％、温度280C。 转速120r／rain，摇瓶装量55ml／250ml，发酵液起始PH5．5，接种量7％，发 酵时间5．5d，菌丝体干重达到3．82le,／loolnl，比现有文献报道值提高了约 67．63％。我们对亮菌深层液体发酵条件盼优化调控及发酵中菌体生长规律 及产物代谢特点的了解，为将来应用于工业化大规模发酵生产提供了～定 的理论依据。 3。采用单因素实验和多因素正交试验。初步筛选出匿态发酵提取多糖的最佳条 件为；浸提温度90℃、浸提时间2．5h、固液比1：5。 通过实验证明了采用反复冻融和高速离心的方法来处理液体发酵产物提取 亮菌胞内多糖，可以减少工作量及多糖活性的破坏，并且使多糖的提取率提 四川丈学碗L学位论文高了约30％。同时本实验采用纤维素柱对亮菌胞内多糖进行了纯化，并通 四川丈学碗L学位论文 高了约30％。同时本实验采用纤维素柱对亮菌胞内多糖进行了纯化，并通 过红外扫描、琼脂糖凝胶电泳、硫酸基含量测定对其进行了结构分析，证明 了亮菌多糖活性的可靠性。为以后进行亮菌多糖理化性质的研究提供了理论 基础。 4．通过对血清溶血素值、RES吞噬功能、儿一2、NK细胞活性检测，研究亮 菌多糖对小鼠免疫功能的影响，表明亮菌多糖能使小鼠机体免疫力增强。同 时，通过小鼠化学肝损伤的实验和对肿瘤小鼠的一些免疫指标的检测，可以 看出亮菌多糖不仅对化学肝损伤有预防作用，而且亮菌胞内多糖还具有一定 的抗肿瘤作用。这些药效学实验结果表明亮菌多糖是个非常有开发价值的活 性物质。 关键词：亮菌，固态发酵，液体深层发酵，纯化，免疫 四川人学硕t学位论文The 四川人学硕t学位论文 The research of the ferment technology and polysaccharide ofArmillariella M硝or：Microbiology G髓duak student：GAO Ting Advisor：．SUN Qi·ling The objective of thesis was to develop a fermentation bioproccss by a strain of Armillariella tabescem．s and tO study the extration and purification of Armillarieila polysaccharide and the effect in pharmacology．The research content included，(1)血e technology of sofid fermentation and liquid fermentation condition of Armillariella； (2)the extration and purification of Armillariella polysaecharide and simple configuration identification；(3)the effect of ArmiUariella polysaecharide in pharmacology．Main results are as follows： 1．The research result of solid fermentation：Confirming the optimum time is 45d according to the content of polysaccharide．Several enzymes