两肾一夹高血压模型内皮一型环氧化酶介导的前列环素合成通路及其对血管功能的调控-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 I I PAGE PAGE IV 摘 要 背景和目的 高血压病是心血管系统较常见的疾病，常合并心、脑、肾血管病变，是危害人类健 康的主要隐患之一。有研究表明，环氧化酶（cyclooxygenase；COX）催化的花生四烯 酸（arachidonic acid；AA）代谢产生前列环素（prostacyclin；PGI2）在高血压的内皮功 能失调中起着重要作用。目前普遍认为，血管内皮 PGI2 主要由 COX-2 催化的代谢产生。 然而，本课题组前期研究发现，在某些血管如小鼠的腹主动脉及猪肾叶间动脉，PGI2 主要 由 COX-1 催化 AA 产生，且其不但不诱发舒张效应，反而具有诱发收缩作用。同时，我们 发现，PGI2 可同时作用于 PGI2 受体（IP 受体）和血栓烷素受体（TP 受体）；且在 IP 受体 的功能缺失或低表达的血管，主要作用于 TP 受体诱发血管收缩，而在其他血管如小鼠肠 系膜动脉表现为诱发血管舒张效应。 由于 PGI2 作用的双重性，因此，由内皮 COX-1 合成 此产物的病理生理意义尚待进一步明了。 本研究的目的是进一步阐明 COX-1 基因敲除对 高血压发病及发展的影响，并确定 COX-1 介导的内皮 PGI2 合成在高血压血管功能调控中 的作用。 方法 1）通过 C57BL/6 小鼠和同基因型背景的 COX-1 基因敲除（COX-1-/-）小鼠建立两 肾一夹（Two-Kidney，one-clip，2K1C）高血压模型，分别检测小鼠的收缩压（尾套加 压法）及心脏大小改变。 2）分别采用蛋白免疫印记法、实时定量 PCR 检测 COX-1 及前列环素合成酶（PGI2 synthase；PGIS）蛋白表达、TP、IP 受体 mRNA 表达在 2K1C 组小鼠血管中的改变。 3）采用高效液相-质谱（HPLC-MS）方法检测乙酰胆碱刺激小鼠主动脉中 PGI2 代 谢产物 6-keto-PGF1α 的产生。 结果 1）C57BL/6 及 COX-1 基因敲除小鼠右肾动脉钳夹后第 28 天血压及心脏/体重比较 Sham 对照组显著升高, 然而，COX-1-/-右肾动脉钳夹后收缩压及心脏/体重比与 C57BL/6 相比显著降低。 2）与 Sham 组相比，C57BL/6 小鼠 2K1C 高血压组主动脉中 COX-1 蛋白表达显著 降低，而在肠系膜动脉中 COX-1 表达无显著改变。另外，PGIS 的蛋白表达在主动脉及 肠系膜动脉均无明显改变。且 2K1C 组小鼠主动脉中乙酰胆碱刺激 6-keto-PGF1α 的产量 显著降低。敲除 COX-1 消除 Sham 及 2K1C 小鼠主动脉 6-keto-PGF1α 的产生。 3）实时荧光定量 RT-PCR 结果显示，与 Sham 组相比，2K1C 组小鼠的主动脉中，TP 受体的 mRNA 增加（5.86 倍）比 IP 受体增加（2 倍）显著；而在肠系膜动脉中，IP 受体 显著降低（~1/2），TP 受体无明显改变。 结论 1）COX-1 基因剔除减轻单肾动脉钳夹诱发的高血压病的发生。 2）在 2K1C 高血压小鼠的某些动脉血管，如主动脉主要由 COX-1 主导内皮 PGI2 的合 成，且在该类 PGI2 诱发收缩反应血管，COX-1 表达发生选择性下调，导致 PGI2 合成减少。 3）在 2K1C 高血压小鼠动脉血管 TP 相对 IP 受体表达比例升高，后者可能导致 PGI2 在高血压病变血管收缩性能增强，而舒张效应降低。 【关键词】 环氧化酶；花生四烯酸；前列环素；两肾一夹高血压模型 III III PAGE PAGE IV Abstract Background and Objective Hypertension, a common disease of the cardiovascular system that is often associated with vascular lesions in the heart, brain, kidenys, is one of the major risks to human health. Endothelial prostacyclin (PGI2) derived from cyclooxygenase (COX)-catalyzed metabolism arachidonic acid (the AA) plays an important role in regulating vascular function of diseases, such as hypertension. Cu