卵母细胞体外成熟的临床和基础研究-医学遗传学专业论文.docxVIP

摘要本研究在临床上建立了辅助生殖技术中人卵母细胞体外成熟的 摘要 本研究在临床上建立了辅助生殖技术中人卵母细胞体外成熟的 培养体系，研制了以人成熟卵泡液为重要成分的体外成熟培养液。对 因顽固的多囊卵巢综合征(PCOS)、有卵巢过度刺激综合征(OHSS) 风险，以及体外受精和胚胎移植(IVF．ET)周期中卵巢反应不良的 不孕患者共45例53个周期，进行了未成熟卵母细胞的体外成熟 (IVM)培养、受精和胚胎移植的治疗。共得到未成熟卵475个，平 均每周期8．96个；有374个卵子成熟，体外成熟率78．73％； 有264 个卵母细胞受精，受精率70．58％；有ll例获得临床妊娠，妊娠率 20．75％。已有8例分娩了11个健康孩子。临床研究证明，IVM技术 对于排卵障碍中卵母细胞成熟阻滞和卵巢过度刺激风险的不孕症患 者是一项有效的治疗方法，可以提供无或轻微卵巢刺激的、简便、安 全和较好的妊娠率的一种新的辅助生殖技术，有非常广阔的临床应用 前景。人成熟卵泡液是一种安全、方便、价廉而高效的体外成熟培养 成分。既往的研究表明卵母细胞的成熟与蛋白质合成、磷酸化状态的 改变密切相关。但仍有许多未知蛋白和已知蛋白参与调节的具体过 程，还有许多调控机制尚不明确。人们期待从蛋白质功能水平上直接 揭示疾病、发育的发生机制。为了进一步研究卵母细胞成熟的调控机 制，研究卵母细胞体外成熟的分子环境，和未成熟卵体外成熟的培养 体系，本研究采用了蛋白二维电泳和蛋白质谱分析技术在蛋白质组水 平上研究最重要的促成熟因子之一的促性腺激素LH在小鼠卵巢周期 中对卵子成熟过程的影响。分析了25个差异蛋白，其中24个为上调 蛋白，1个为下调蛋白，有13个蛋白质以前未在卵巢组织中报道。 采用实时PCR、western blotting、免疫组化方法从基因和蛋白水平 验证该蛋白的表达规律。 关键词：卵母细胞体外成熟，不孕症，蛋白质组，黄体生成素(LH) ABSTRACTThis ABSTRACT This study has established a new method for treating infortile women by in vitro oocyte maturation program．Set up a culture system of the medium with essentiaI supplements and human mature follicular fluid． IVM was performed on 45 infertile patients(53 cycles)with POCS， 0HSS in the previous or the stimulated cycles．and poor responder in conventional IVF cycles．Totally 475 oocytes were collected，meanly 8．96 OOCytes each cycle．First polar bodies were observed in 374 oocytes， maturation rate was 78．73％．There were 264 oocytes getting into pronucleus stage．fertilization rate was 70．58％．Eleven clinical pregnancies were obtained．pregnancy rate was 20．75％．The 11 heathy babies had been bom in 8 pregnancies．The result of Our study indicated that IVM is one of the new assisted reproductive technologies for the infertile women with PCOs，retardation of oocyte development and with the risk of OHSS．Human mature follicular fluid would be an idea nature component in maturation medium for the oocytes maturation in vitro and provide much simplified and practice method for clinic use． Previous research have already proved that oocyte maturation associates with man