卵巢组织的玻璃化冷冻保存技术研究-细胞生物学专业论文.docxVIP

卵巢组织的玻璃化冷冻保存技术研究卵巢组织的玻璃化冷冻保存技术研究 卵巢组织的玻璃化冷冻保存技术研究 卵巢组织的玻璃化冷冻保存技术研究 中文摘要 目的：探讨使用玻璃化冷冻技术对卵巢组织的冷冻保存效果。寻找对卵巢组织更 为适宜的冷冻保护液配方。 方法：收集10．14dpc ICRd,鼠的卵巢和2例人卵巢组织标本(切成约l×1×1．2mm3 组织块)，采用四种不同的玻璃化冷冻保护液：40％乙二醇+18％Ficoll．70+0．3M蔗 糖；40％丙二醇+18％Ficoll．70+0．3M蔗糖；2．62M-甲基亚砜+1．31M丙二醇 +O．0075M聚乙二醇+2．6M乙酰胺；1．5M丙二醇+O．1M蔗糖对卵巢组织进行 ．205℃表面玻璃化冷冻。通过对冷冻复苏前后小鼠卵泡的活性和人卵巢组织形态 学评价，对冷冻保存效果进行检测。 结果：在小鼠卵巢组织玻璃化冷冻实验中，比较了四种玻璃化冷冻保护液冷冻保 存小鼠卵巢的窦前卵泡的复苏率和体外培养的贴壁率，两两之间均有显著性差异 (尸O．01)。其中冷冻保护液A的复苏率和1天、5天卵泡贴壁率分别为55．13％、 30．90％和27．05％，标准差(SD)分别为为4．72、1．60和4．28，变异系数(CV) 分别为为8．56、5．18和15．82；冷冻保护液B的复苏率和1天、5天卵泡贴壁率分别 为42．74％、25．05％和18．47％，标准差(SD)分别为3．30、5．27和5．02，变异系 数(CV)分别为7．72、21．02和27．19；冷冻保护液C的复苏率和1天、5天贴壁率 分别为62．79％、39．39％和32．68％，标准差(SD)分别为5．83、2．37和3．13，变 异系数(Cv)分别为9．28、6．02和9．59；冷冻保护液D的复苏率和l天、5天贴壁 率分别为23．89％、13．31％和7．87％，标准差(SD)分别为3．90、3．67和2．50，变 异系数(Cv)分别为16．31、27．55和31．79。冷冻保护液C的冷冻保存效果最好。 在人卵巢组织玻璃化冷冻实验中，各冷冻保护液组与正常组织有明显的差异 (尸O．005)。冷冻保护液C的冷冻保护效果最好(PO．005)，冷冻复苏后的组织中 有63．41％的卵泡形态正常，在新鲜组织组中卵泡的形态正常率为89．86％。在冷 冻保护液A、B和D组之间结果没有统计学差别(P0．05)(30．26％，36．23％和 23．60％)。 结论：1．-205℃表面玻璃化冷冻是一种简便有效的卵巢冷冻方法。 2．冷冻保护液C是一种良好的保存卵巢组织的玻璃化冷冻保护液。 【关键词】卵巢组织固体表面玻璃化冷冻保存 福建医科大学硕士学位论文 福建医科大学硕士学位论文 卵巢组织的玻璃化冷冻保存技术研究 ‘一 lnVeStlgatlon On vitritication oI OVary tissue Abstract Objective：To invsetigate the effect of vitrification on ovarian tissue．And to find out the optimal eryoprotectant for the vitrification of ovarian tissue． Methods：Ovary tissues from 10-14 dpc ICR mice and Human ovarian biopsies from 2 patients(cut in l l l一2 ITlm3 pieces)were exposed to：40％ethylene glycol+1 8％ Ficoll-70+0．3M sucrose；40％propylene glycol+l 8％Ficoll-70+0．3M sucrose；2．62M dimethyl sulfoxide+1．3 1 M propylene glycol+0．0075M polyethylene glycol+2．6M acetamide；1．5M propylene glycol+0．1M sucrose．The viability of follicles from mice and the general morphology of human follicles were analyzed and compared with fresh group after freezing(-205。C surface vitrification)and thawing． Results：In the mice ovary tissue vitrification experiment，there are significant differenc