第十一章吸光光度法.PPT

不同光谱区间对应的分析方法 （三）吸收池:用于盛待测及参比溶液。 玻璃 — 能吸收UV光，仅适用于可见光区 石英 — 不吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致） 光电管 光电倍增管（160-700 nm） 1) 生色团（发色团） 能吸收紫外-可见光的基团 有机化合物：具有不饱和键和未成对电子的基团产生n→ π*跃迁和π→ π*跃迁, 跃迁E较低 3) 红移和蓝移 由于化合物结构变化（共轭、引入助色团取代基）或采用不同溶剂后，吸收峰位置向长波方向的移动，叫红移; 吸收峰位置向短波方向移动，叫蓝移。 4) 增色效应和减色效应 增色效应：吸收强度增强的效应 减色效应：吸收强度减小的效应 5) 强带和弱带 εmax105 → 强带 εmin103 → 弱带 3. 示差吸光光度法 示差法标尺扩展原理： 二、双波长吸光光度法 基本要求： 二、物理化学常数的测定（一）弱酸碱离解常数的测定 （三）配合物不稳定常数的测定 不需参比溶液；但要两个单色器获得两束单色光(λ1和λ2)；以参比波长λ1处的吸光度Aλ1作为参比，来消除干扰。 在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时有很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度都比单波长法有所提高。 ΔA ＝Aλ2 －Aλ1 ＝ (ελ2 －ελ1)b c 两波长处测得的吸光度差值ΔA与待测组分浓度c成正比。ελ1和ελ2分别为待测组分在λ1和λ2处的摩尔吸光系数。 测量波长λ2和参比波长λ1的选择与组合 一、分光光度计的构成 （一）光源 在所需的光谱区域内能够发射连续辐射，有足够的辐射强度和良好的稳定性，而且辐射能量随波长的变化应尽可能小。 配有稳压装置 （二）单色器 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。 ①入射狭缝：光源的光由此进入单色器； ②准光装置：透镜或反射镜使入射光成为平行光束； ③色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅； ④聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝； ⑤出射狭缝。 入射狭缝 准直透镜 棱镜 聚焦透镜 出射狭缝 白光 红 紫 λ1 λ2 800 600 500 400 狭缝的大小直接影响单色光纯度，但过小的狭缝又会减弱光强。 单色器其核心部分是色散元件，起分光的作用。单色器的性能直接影响入射光的单色性，从而也影响到测定的灵敏度度、选择性及校准曲线的线性关系等。 能起分光作用的色散元件主要是棱镜和光栅。 棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同 棱镜有玻璃和石英两种材料。 由于玻璃可吸收紫外光，所以玻璃棱镜只能用于350 ~ 3200 nm的波长范围，即只能用于可见光域内。 石英棱镜可使用的波长范围较宽，可从185 ~ 4000nm，即可用于紫外、可见和近红外三 个光域。 光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm )。 M1 M2 出射狭缝 光屏 透镜 平面透射光栅 光栅衍射示意图 光栅是利用光的衍射与干涉作用制成的，它可用于紫外、可见及红外光域，而且在整个波长区具有良好的、几乎均匀一致的分辨能力。 硒光电池 （四） 检测器 利用光电效应，将光能转成电流讯号。 光电池，光电管，光电倍增管 红敏管 625-1000 nm 蓝敏管 200-625 nm Ni环（片） 碱金属 光敏阴极 h? 待扫描 1个光电子可产生106～107个电子 （五）信号显示系统 它的作用是放大信号并以适当方式指示或记录下来。常用的信号指示装置有直读检流计、电位调节指零装置以及数字显示或自动记录装置等。很多型号的分光光度计装配有微处理机，一方面可对分光光度计进行操作控制，另一方面可进行数据处理。 二、分光光度计的类型 根据仪器适用的波长范围 可见分光光度计、紫外-可见分光光度计、红外分光光度计 根据仪器的结构和功能不同 单光束分光光度计、双光束分光光度计、双波长分光光度计 1.单光束分光光度计 适于在固定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。 参比溶液移入光路调节吸光度零点，手动拉杆将试液移入光路测吸光度 M1 M3 M2 M4 2.双光束分光光度计 自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，价格较高。 M1透射、M4反射、参比、I0 M1反射、M4透射、试液、It 3.双波长分光光度计 将不同波长的两束单色光(λ1、λ2) 快束交替通过同一吸收池