第02章核酸的结构与功能.PPT

四 、其他小分子RNA及RNA组学 除了上述三种RNA外，细胞的不同部位存在的许多其他种类的小分子RNA，统称为非mRNA小RNA(small non-messenger RNAs, snmRNAs)。 snmRNAs snmRNAs的种类 核内小RNA(snRNA) 核仁小RNA(snoRNA) 胞质小RNA(scRNA) 催化性小RNA(small catalytic RNA) 小片段干涉 RNA(siRNA) snmRNAs的功能 参与hnRNA和rRNA的加工和转运。 2006年度诺贝尔生理学或医学奖得主 克雷格·梅洛 安德鲁·法尔 (Craig C. Mello ) (Andrew Z. Fire ) 获奖原因：- 发现了控制基因信息流动的基本机制，因RNA干扰(RNAi )的发现而入选。RNA干扰是一个生物过程，在这个过程中双链RNA以一种非常明确的方式抑制了基因表达。自1998年发现以来，RNA干扰已经作为一种强大的“基因沉默”技术而出现。这项技术被用于全球的实验室来确定各种病症中哪种基因起到了重要作用。 RNA组学研究细胞中snmRNAs的种类、结构和功能。同一生物体内不同种类的细胞、同一细胞在不同时间、不同状态下snmRNAs的表达具有时间和空间特异性。 RNA组学 核 酸 的 理 化 性 质 The Physical and Chemical Characters of Nucleic Acid 第 四 节 目 录 一、核酸的一般理化性质 较强的酸性 紫外吸收： 260nm(嘌呤和嘧啶环中含共轭双键)。 1. DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA（或RNA） 20μg/ml寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 OD260的应用 目 录 二、DNA的变性(denaturation) 定义：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 方法：过量酸，碱，加热，变性试剂如尿素、 酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。 变性后其它理化性质变化： OD260增高 粘度下降 比旋度下降 浮力密度升高 酸碱滴定曲线改变 生物活性丧失 目 录 DNA变性的本质是双链间氢键的断裂 例：变性引起紫外吸收值的改变 DNA的紫外吸收光谱 增色效应：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 目 录 热变性 解链曲线：如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260（absorbance，A，A260代表溶液在260nm处的吸光率）值作图，所得的曲线称为解链曲线。 目 录 Tm：变性是在一个相当窄的温度范围内完成，在这一范围内，紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(melting temperature, Tm)。 目 录 Tm与（G＋C）含量百分比数成正比： (1)Tm=69.3+0.41(G+C)% (2)Tm=4(G+C)+2(A+T) (＜20bp的寡核苷酸） 三、DNA的复性与分子杂交 DNA复性(renaturation)的定义 在适当条件下，变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。 减色效应 DNA复性时，其溶液OD260降低。 复性的最佳条件： （Tm－25）°C。 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火(annealing) 。 目 录 不同来源，但具有同源性的两条DNA或RNA单链按碱基配对原则结合在一起,形成杂化双链(heteroduplex)。此现象称为核酸分子杂交。杂交可以在不同的DNA-DNA之间，也可以在DNA-RNA之间或者RNA-RNA之间进行。 核酸分子杂交(hybridization) DNA-DNA 杂交双链分子 变性 复性 不同来源的DNA分子 核酸分子杂交的应用 研究DNA分子中某一种基因的位置 鉴定两种核酸分子间的序列相似性 检测某些专一序列在待检样品中存在与否 是基因芯片技术的基础 第 五 节 核 酸 酶 Nuclease 核酸酶是指所有可以水解核酸的酶 依据底物不同分类 DNA酶(deoxyribonuclease, DNase)： 专一降解DNA。 RNA酶 (ribonuclease, RNase)： 专一降解RNA。 依据切割部位不同 核酸内切酶：分为限制性核酸内切酶和非特异性限制性