免疫学检测原理.pptVIP

第二节 二、淋巴细胞功能测定（了解） 2．细胞毒试验 CTL、NK细胞可直接杀伤不同靶细胞（如肿瘤细胞、移植供体细胞等）。通过检测杀伤活性可用于肿瘤免疫、移植排斥反应、病毒感染等方面研究。 （1）51Cr释放法：（图21-11）。 （2）乳酸脱氢酶（LDH）酶释放法： （3）细胞凋亡检查法： 第二节 二、淋巴细胞功能测定 3．分泌功能测定（了解） （1）细胞因子分泌细胞的测定： （2）抗体形成细胞测定：常用溶血空斑试验(hemolytic plaque assay)，即测定针对SRBC表面已知抗原的抗体形成细胞数目。其原理是：抗体形成细胞分泌的Ig与SRBC表面抗原结合，在补体参与下出现溶血反应。每一空斑中央含一个抗体形成细胞，空斑数目即为抗体形成细胞数（图21-12）。亦可采用RHPA和ELISPOT法检测抗体分泌细胞。 图21-12 溶血空斑试验 第二节 二、淋巴细胞功能测定 （二）淋巴细胞功能测定的体内试验（了解） 正常机体对特定抗原产生细胞免疫应答后，再用相同抗原作皮肤试验，即出现以局部红肿为特征的迟发型超敏反应，细胞免疫低下者呈阴性反应。皮肤试验方法简便，可辅助诊断某些病原微生物感染（结核杆菌、麻风杆菌）、免疫缺陷病等。皮肤试验常用的生物性抗原多从病原体中提取，如结核菌素、麻风菌素、链激酶-链道酶、念珠菌素、腮腺炎病毒等。 第三节 免疫分子的检测 一、免疫球蛋白的测定（了解） 免疫球蛋白的测定有两类方法：①在体外用已知抗原检测相应抗体，用于多种感染性疾病的辅助诊断与流行病学调查（前已述及）；②用已知抗体对各类免疫球蛋白作定性、定量测定。检测血清含量高的IgG、IgA、IgM时，可用免疫比浊法；检测IgD、IgE选用ELISA、RIA等灵敏度高的方法。诊断免疫球蛋白异常性疾病（如骨髓瘤、性联无丙种球蛋白血症等），可用免疫电泳等方法 第三节 二、补体测定（熟悉） 测定血清补体含量与活性有助于了解体内补体激活状况，辅助有关疾病的诊断。对血清含量高的C3、C4、B因子等，可用免疫比浊法，其他含量低的成分则借助ELISA、RIA等方法。血清总补体活性测定常采用50%补体溶血法（CH50），其原理是：用SRBC和兔抗SRBC作为抗原抗体复合物，通过经典途径激活待检血清中的补体，导致SRBC溶解。若待检血清补体含量减少或成分缺失，则影响溶血结果，通常以50%溶血所需的最小补体量表示总补体活性 第三节 三、细胞因子检测 （了解） 细胞因子检测可分为免疫学测定法、生物学活性测定法及分子生物学测定法。 （一）免疫学测定法 1．分泌性细胞因子检测 常用方法为双抗体夹心法、ELISA、免疫斑点法、放射免疫法（RIA）、ELISPOT、免疫印迹法等。某些细胞因子含量甚微的样品（如脑脊液）可用免疫聚合酶链反应（immuno-PCR）。 2．胞内细胞因子检测 采用FCM免疫荧光技术可从单细胞水平检测不同细胞亚群中的细胞因子，用两种不同的荧光素分别标记抗不同细胞因子的抗体，可在同一细胞内同时检测两种不同的细胞因子，也可用多参数流式细胞术对胞内多种细胞因子进行检测。 第三节 三、细胞因子检测 （二）生物活性测定法 1．促进细胞增殖和增殖抑制法 2．抗病毒活性测定法 3．直接杀伤法 4．趋化活性测定法 此外，某些细胞因子能诱导靶细胞表达某些膜分子或可溶性蛋白质，可用荧光素标记抗体检测表达相应分子的细胞数，或测定细胞所分泌的蛋白质，间接了解细胞因子活性。 第三节 三、细胞因子检测 （三）分子生物学测定法 具体方法为聚合酶链反应（PCR）、实时定量PCR、RNA印迹法、核酸酶保护分析法和原位杂交法等，例如：根据细胞因子基因核苷酸序列设计相应引物，借助逆转录PCR测定待检细胞中特异性mRNA。 第三节 四、CD分子、表面受体和黏附分子的检测（了解） 检测细胞表面CD分子、表面受体和黏附分子可用于鉴别免疫细胞及其亚类，并了解其分化、活化状况。用已知的抗CD分子、表面受体或黏附分子抗体可鉴定细胞表面相应膜分子，常用的方法有间接免疫荧光法、流式细胞术等。某些CD分子、受体分子和黏附分子还存在可溶性形式，可采用ELISA等免疫学方法测定其含量。 第三节 五、HLA型别分析（了解） 以往主要借助血清学和细胞学方法进行HLA型别分析，目前基因分型已成为主流技术，常用者为指纹图谱技术、聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSOP)、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）、聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)、聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）、单核苷酸多态性分析（SNP）等。HLA分型技术在同种移植供、受者配型、亲子鉴定和某些疾病研