任务5 高效液相色谱法 分离原理.pptVIP

使用条件 为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值，但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5（2~8）。 太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。 键合相色谱—固定相 特点 使用过程中不流失 均一性和化学稳定性好 重现性好分离效率高 适于梯度洗脱 传质阻抗小 * 2109年5月18日 反相色谱 常见流动相 流动相洗脱强度顺序：水甲醇乙腈乙醇四氢呋喃丙醇二氯甲烷（与水不混溶） 若采用含一定比例的甲醇或乙腈的水溶液作流动相，可用于分离极性化合物 若采用水和无机盐的缓冲液为流动相，则可分离一些易离解的样品，如有机酸、有机碱、酚类等 常见固定相 反相色谱法最常用的固定相是C18、C8和苯基键合相的填料，在分离极性很大的化合物时，也可以采用氨基、氰基等极性基团键合固定相。 键合相色谱—流动相 * 2109年5月18日 疏溶剂理论： 当溶质分子进入极性流动相后,即占据流动相中相应的空间，而排挤一部分溶剂分子； 当溶质分子被流动相推动和固定相接触时，溶质分子的非极性部分或非极性分子）会将非极性固定相上附着的溶剂膜排挤开，直接和非极性固定相上的烷基官能团相结合（吸附）形成缔合物，构成单分子吸附层； 当流动相极性减小时，这种疏溶剂斥力下降，会发生解缔，并把溶质分子释放而被洗脱下来 反相色谱法的分离机理1 * 2109年5月18日 影响溶质保留的三个主要因素： 溶质分子中非极性部分的总表面积 溶质和固定相接触的总表面积愈大，保留值愈大，所以溶质的极性愈弱，疏水性越强，保留值越大。 键合相上的烷基总面积 烷基键合固定相的作用在于提供非极性的作用表面。随着碳链的加长，烷基的疏水特性增强，溶质的保留值也随烷基碳链长度的增加而增大。 流动相的表面张力 流动相的表面张力愈大，介电常数愈大，极性亦愈强；溶质和烷基键合相的缔合作用愈强，流动相的洗脱强度弱，导致溶质的保留值大。 反相键合相色谱法的分离机理2 * 2109年5月18日 时间，min 固定相：C1 固定相：C8 固定相：C18 1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯 例：反相键合色谱中，键合相碳链越长，分离效果越好。 分离机理实例 * 2109年5月18日 正相色谱法 反相色谱法 1.极性固定相 聚乙二醇、氨基与腈基键合相 2.相对非极性流动相 正已烷、环已烷 3.极性调节剂??? 乙醇、四氢呋喃、三氯甲烷 4.分离中等极性和极性较强化合物.? ??酚类、胺类、羰基类及氨基酸类 5.组分流出顺序 极性小先洗出 1.非极性固定相 C18（简称ODS） 、C8 2.极性流动相 水或缓冲液 3.极性调节剂??? 甲醇、乙腈、四氢呋喃 4.分离非极性和极性较弱化合物 占整个HPLC应用的80%左右 5.组分流出顺序 极性大先洗出 液液分配色谱 * 2109年5月18日 其他类型色谱法 按分离机制分类： 液固吸附色谱法 离子色谱法 凝胶色谱法（分子排阻色谱法） （空间排阻色谱法） 其他类型色谱法 * 2109年5月18日 氯化噻吩嗪 四种异构体的分离色谱图 氯化噻吩嗪四种异构体的分离 异构体具有不同的空间排列方式，因此吸附剂对它们的吸附能力有所不同，从而得到了分离。 液固吸附色谱实例 * 2109年5月18日 液固吸附色谱法 固定相：吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5-10μm 流动相：有机溶剂 适用于分离分子量200-1000的组分，大多数用于 非离子型化合物的分离，常用于分离同分异构体。 液固吸附色谱 各组分的出峰顺序 极性较小组分，吸附力较弱，容易解吸，先流出。 极性较大组分滞留作用大，后流出。 饱和烃 烯 芳烃 醚 醛酮 酸 * 2109年5月18日 吸附 脱附 再吸附 再脱附 … 分离过程是一个吸附 －脱附的平衡过程。 液固吸附色谱法分离机理 液固吸附色谱分离机理 * 2109年5月18日 离子交换色谱法 油田水质中的阴离子分析 固定相：薄壳型阴离子交换树脂 (3×250mm) 流动相：0.003mol·L-1 NaHCO3 / 0.0024 mol·L-1?Na2CO3 离子色谱法实例 * 2109年5月18日 离子交换色谱法 固定相:离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架， 在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基 阳离子交换树脂 在表面未端芳环上接上季胺基 阴离子交换树脂