质粒的提取和鉴定,DNA酶切.pptVIP

碱变性法小量提取质粒，DNA的限制性酶切 厦门大学医学院 分子生物学实验教学组 分离质粒DNA的 基本步骤 培养细菌使质粒扩增； 收集和裂解细菌； 分离和纯化质粒DNA 质粒DNA电泳 电场中DNA分子的迁移速度取决于： DNA分子本身的大小 DNA分子的空间构型 超螺旋构型（ccDNA) 线形DNA(lDNA) 开链环状DNA(ocDNA) 复制中间体（没有复制完的两个质粒连在一起) 质粒DNA提取常见问题 质粒DNA提取常见问题 DNA的限制性酶切 Plasmid (质粒) Plasmid map Polylinker Sequence map Restriction enzyme map Polylinker (多克隆位点） Sequence Map Restriction map Ⅱ型限制与修饰系统 占90%以上，即通常指的DNA限制性内切酶，它们能识别双链DNA的特异顺序，并在这个顺序内进行切割，产生特异的DNA片段； Ⅱ型酶分子量较小，仅需Mg2+作为催化反应的辅助因子，识别顺序一般为4-6个碱基对的反转重复顺序； Ⅱ型内切酶切割双链DNA产生3种不同的切口：5’端突出，3’端突出和平末端。 酶切反应中应注意以下几个问题： 1. 内切酶：不应混有其他杂蛋白特别是其他内切酶或外切酶的污染；注意内切酶的识别位点和形成的粘性末端； 2. 内切酶的用量：