扇贝裙边糖胺聚糖抑制脂质过氧化物及自由基对血管内皮细胞损伤的作用与机理研究-药理学专业论文.docxVIP

第一篇 第一篇 论 文 扇贝裙边糖胺聚糖抑制脂质过氧化物及自由基对血 内皮细胞损伤的作用与机理研究 研 究 生 张俊玲 指 导 教 癖 刘赛 教授 青 岛 大学 医 学 院药理教研室 扇贝裙边糖胺聚糖抑制脂质过氧化物及自由基 扇贝裙边糖胺聚糖抑制脂质过氧化物及自由基 对盘管内皮细胞损伤的作用与机理研究 中 文 摘 要 目的：探讨扇贝裙边提取物(ESS)抗动脉粥样硬化(AS)作用，研 究其多糖成分一糖胺聚糖(SS～GAG)对脂质过氧化物及自由基损伤血管内皮 细胞的形态及合成和分泌功能的影响。 方法：i、用体外培养的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC，CRL-2480)， 建立氧化低密度脂蛋白(OX—LDL)诱导的血管内皮细胞损伤模型，应用 MTT方法观察分析ss—GAG对血管内皮细胞氧化损伤后的增殖活性抑制的 影响。 2、采用过氧化氢(mO：)造成血管内皮细脆体外氧化损伤约模型。 用kffT方法观察SS—GAG对过氧化氢(H,O：)引发的血管内皮细胞氧化损伤 的增殖活性撺制的影穗。 3，用黄瞟岭氧化酶法测定血管内皮细胞内蓬氧化物歧化酶(SOD)的 活性，分析SS—GAG对OX LDL诱导的血管内皮细胞氧化损伤后细胞的SOD 活性的影响；通过硫代巴比妥酸反应物(TBARS)方法测定血管内疫细胞 内脂质过氧他损伤的代表性代谢产物丙=醛(MDA)的含囊，分折SS-GAG 对OX—LDL造成的血管内皮细胞脂质过氧化损伤后细胞的丙二醛(MDA)含 量熊影响。 4、建立Ox—LDL诱导的血管蠹皮细胞氧纯掼伤模型，用硝酸还原酶 法测定SS—GAG对血管内皮细胞的血管依赖性舒张因子／一氧化氮 EDRF／NO)含量的影响；用化学比色法测定分析SS—GAG对血管内皮细胞 内豹肉皮型一氧化氮合成酶(eNOS)活性的影响。 5、利用OX—LDL所致的血管内皮细胞氧化损伤模型，用放射免疫法 测定血管内皮细胞合成分泌的前列环素I。(PG I。)的稳定性代谢产物6一 酮一虢列腺索F，。(PGF。。)和血栓素A。(TXA。)的稳定性代谢产物血栓煮 (TXB：)的台量，分析SS—GAG对血管内受细胞氧化损伤后的台成分泌功 能的影响。 结果： l、OX-LDL损伤的模型组血管内皮细胞与正常对照组血管内 皮细胞比较，维脆数繁显著减少，YTT染色吸光度(OD值)明显下降 (PO (PO01)：而用SS—GAG(终浓度为50“g／ml～1600“g／m1)预处理的备保 护组血管内度细胞的细胞数量，MTT染色吸光度(OO值)均较模型维细胞 明显增加(PO．01)；高剂量(终浓度为200}Ig／ml～1600pg／m1)SS—GAG 保护组血管内皮细胞的增殖活性明显高于低剂量(终浓度为50“g／m1)保 护组的血管淹皮细胞的增殖活性(PO．05){甚至有的SS—GAG保护组(终 浓度为400¨g／ml～i600pg／m1)细胞增殖活性超过正常对照组细胞的增殖 活性(PO。05)；SS—GAG对照缎血管内皮细胞数量、MTT染色吸光度(OD 值)与正常对照组细胞比较也明显增捆(PO．01)。 2、H,O。损伤的模型组血管内皮细胞与正常对照组内皮细胞比较，增 殖活性明显下降(P0．0I)；丽经SS—GAG(终浓度分别为50¨g／m1． 10099／m!，200pg／m1)颈处瑾屠，血管内皮细胞的损伤明显减轻，细胞增 殖活性较模型组细胞明显增加(PO 01)。 3、与正常对照组血管虑皮细胞比较，经OX-LDL损伤的模型坦蠹皮 细胞内的SOD活性明显减弱，MDA含量鹱显增加(PO。01)；丽经SS—GAG (终浓度分别为50pg／ml，10099／ml，20099／m1)预处理的各保护组血管 内皮纲胞与模型组内皮细胞枢魄，细胞雨SOD活性明显增强，MDA含鬣明 显减少(PO．01)。 4、用SS—GAG(终浓度分别为50¨g／ml，]00”g／ml，200¨g／m1)预处 理的各保护组血管肉皮缁胞虽然同样受到OX LDL损伤，但与模型雏内皮 细胞比较，其细胞内的NO含量明显增加，eNOS活性明显增强(PO．0 L)： 经Ox—LDL损伤的模烈组血管内皮细胞与正常对照组内皮细胞比较，其内 皮细胞内盼NO食量明显减少，eNOS活性明显降低(PO。01)。 5、经OX LDL损伤的模型组血管内皮细胞与正常对照组内皮细胞比 较．细胞培养液中的PGF。。水平明显减少，TXB。水平明显增加(PO．01)： 经SS—GAG(终浓度分别为100pg／ml，200蚝／m1)预处理的吾保护组血管 内皮细胞培养液中的POF。。水平明显增加，TXB。水平明显减少(PO．01)。 结论； SS—GAG不仅可减轻OX—LDL和H：O：氧化损伤造成的血管内皮 细胞增殖活性的抑制．两且还耱促进正常血管内皮细