辣椒疫病种子带菌检测及处理技术研究-蔬菜学专业论文.docxVIP

I I 摘 要 辣椒疫病(Phytophthora capsici)是一种世界性分布的毁灭性病害，严重影响着我国及世 界各国的辣椒生产，给种植者造成巨大的经济损失。本研究分别从病害的初侵染源及传播途 径、检测技术和处理技术等方面进行深入研究，以期为病害的综合防治提供依据。 .采用孢子悬浮液向转色期的辣椒果实胎座注射接种 104 个/mL 孢子悬浮液的方法，可 以有效地获得试验用辣椒疫病种子。分别采用不同的接种方法和接种浓度对辣椒果实进行接 种，之后对辣椒果实的病情指数、辣椒种子带菌情况等进行了调查研究。结果表明，注射法 能有效使辣椒种子感染疫霉菌，其接种浓度为 104 个/mL 孢子悬浮液时，种子带菌的机率最 大。 2.明确了种子带菌、土壤带菌是辣椒疫病的主要初侵染来源及重要的传播途径。采用注 射法、拌土法分别对辣椒果实及土壤接种辣椒疫霉菌，接种后对辣椒种子带菌和带菌种子传 病情况以及菌土中种植的辣椒植株发病情况和土壤中病原菌的存活情况进行了调查研究。辣 椒果实注射接种疫霉菌孢子悬浮液后，能使种子感染疫霉菌，显著降低发芽率和出苗率，出 土的幼苗在苗期生长阶段会发生疫病；菌土中种植的辣椒植株在生长期持续的发生疫病，105 d 时发病率稳定，但此时土壤中的疫霉菌依然存活。 3.研制了辣椒疫霉菌的选择性培养基，可有效检测辣椒疫病种子带菌情况。在国内外疫 霉菌选择性培养基配方研究的基础上，结合杀菌剂筛选，研制了辣椒疫霉菌的选择性培养基， 匹马霉素 10 mg/L、氨苄青霉素 250 mg/L、利福平 10 mg/L、五氯硝基苯 100 mg/L、恶霉灵 100 mg/L、多菌灵 10 mg/L，能有效抑制镰孢菌等杂菌的生长。用此培养基成功地从贮存 120 d 的辣椒疫病种子上分离出疫霉菌，分离率为 2%。 4.建立了辣椒疫霉菌的实时荧光定量PCR检测技术，能够定量检测辣椒种子中的疫霉 菌，灵敏度为10万粒辣椒种子中有1粒带菌种子。应用Real-time PCR对辣椒种子的DNA进行 扩增，分析了辣椒疫霉菌在辣椒种子上的存活时间以及Real-time PCR检测的极限。经过人工 模拟种子带菌检测，可成功地检测出10万粒辣椒种子中的1粒带菌种子，此时病原菌DNA的 最低含量为0.17 fg；此检测体系可从贮存120、150 d的辣椒疫病种子上检测出疫霉菌，贮存 150 d时病原菌DNA的最低含量为21.3 fg。 5.提出了防治辣椒疫病种子带菌的处理技术。结合辣椒疫病防治药剂的离体及活体筛选 结果，选用 50%烯酰吗啉可湿性粉剂和 20%氟吗啉可湿性粉剂 2 种药剂对辣椒疫病种子进 行不同浓度及不同时间的药剂浸种处理，最后进行苗期安全性试验。结果表明，50%烯酰吗 啉可湿性粉剂或 20%烯酰吗啉可湿性粉剂 250 mg/L 浸种 3 h，能有效控制辣椒疫病种子带 菌。 本研究首次制备了研究用辣椒疫病种子，首次建立了用选择性培养基及 Real-time PCR 检测辣椒种子中疫霉菌的技术，对辣椒种子带菌的检测及种传病害的控制有重要的实践意 义。 关键词：辣椒种子；疫霉菌；选择性培养基；实时荧光定量 PCR；药剂处理 II II Abstract As a worldwide devastating disease, Pepper Phytophthora Blight can cause significant yield losses for growers and has become a serious threat to the agricultural production of China and other countries in the world. In order to provide a basis for integrated control , the initial infection sources and channel of spreading disease, detection and treatment technologies were intensively studied in this paper. Pepper seeds can successfully be infected by Phytophthora capsici through injection, under the inoculation concentration of 104 sporangia/mL suspension, and we can effectively obtain pepper seeds with pathogen. Different inoculation methods and inoc