卵子成熟机理的蛋白质组学研究-妇产科学专业论文.docxVIP

南京医科大学硕士学位论文卵子成熟机理的蛋白质组学研究 南京医科大学硕士学位论文 卵子成熟机理的蛋白质组学研究 导师：王淑玉教授 刘嘉茵教授 研究生：孟艳 中文摘要 随着社会发展，不孕症越来越成为困扰夫妻双方身心健康的世 界性问题。世界卫生组织预测，在21世纪，不孕症将成为仅次于肿 瘤和心脑血管病的第三大疾病。故不孕不育症是一项世界性医学和社 会学的重要问题，也是当前生命科学研究的热点。随着辅助生育技术 的目益发展，越来越多的不孕症患者由助孕的方法获得妊娠。在对辅 助生殖技术的研究过程中，人们深刻认识到了如何得到和保留优质卵 子的重要性。卵母细胞发生、发育、成熟的调节机制的一直是研究的 焦点。近年来，人们对卵母细胞和卵泡细胞发育的分子机制进行了大 量的研究，但大多采用单通道模式，即对单个蛋白、基因的功能研究。 蛋白质是基因功能的实施者，蛋白质有自身特有的活动规律，如动态 修饰、加工、转运定位、结构形成、代谢等，均无法从基因组水平上 的研究获知。而且卵子发育过程是一个涉及众多信号分子的调控网 络，包括许多已知及未知的重要蛋白参与，采用单通道的模式无法进 行高效的研究。从蛋白质水平对卵子发育机制进行高通量的研究是本 课题的目标。 20世纪90年代中期，国际上萌发了蛋白质组学这一新的学术领 南京医科大学硕士学位论文域，它是研究细胞内全部蛋白质的组成及其活动规律的科学，是在人 南京医科大学硕士学位论文 域，它是研究细胞内全部蛋白质的组成及其活动规律的科学，是在人 类基因组计划研究发展的基础上形成的新兴学科。蛋白质组学的工作 是从蛋白质水平对疾病和发育的机制进行高通量的生物信息和功能 学研究。双向电泳自七十年代问世以来，已成为一种应用最广泛、最 有效的分离来自各种组织、细胞等生物样品的分离技术，同质谱鉴 定蛋白质技术的合用，是目前用于蛋白质组学最有效的技术手段。对 蛋白质组的分析工作大致有两个方面。一方面，通过二维凝胶电泳得 到正常生理条件下的机体、组织或细胞的蛋白质组全谱，相关数据将 作为待检测机体、组织或细胞的二维参考图谱和数据库。蛋白质组分 析的另一方面，是比较分析在变化了的生理条件下蛋白质组所发生 的变化。本文从这两个角度采用二维电泳技术和质谱分析技术在蛋白 质组水平直接研究卵子发育和成熟的机制，全文分两个部分进行论 述． 第一部分小鼠成熟卵丘一卵母细胞复合体蛋白质二维参考图谱及 蛋白质数据库的建立 哺乳动物自卵巢排出的是停滞在减数分裂II期的成熟卵母细胞， 受精使卵母细胞恢复减数分裂并开始完成与雄原核的结合，启动胚胎 发育过程。但人们对这一系列事件发生的分子机制还知之甚少，其主 要原因是对卵母细胞的分子组成还不甚清楚。 二维参考图谱及蛋白质数据库(蛋白质组全谱)建立的意义即在 于对组织／细胞的分子组成进行全面的阐述，为进一步的分析工作提 南京医科大学硕士学位论文供基础。通过建立小鼠成熟卵丘一卵母细胞复合体(COC)蛋白质二 南京医科大学硕士学位论文 供基础。通过建立小鼠成熟卵丘一卵母细胞复合体(COC)蛋白质二 维参考图谱及蛋白质数据库，一方面可以获得大量蛋白质信息，全面 了解卵母细胞的分子组成，筛选出可能参与卵泡生长／卵子发育的已 知／未知功能的蛋白质，为卵泡生长／卵子发育机制的研究提供新的思 路：另一方面通过小鼠成熟COC蛋白质二维参考图谱的建立，为进 行诸如PCOS、黄素化未破裂综合症等卵泡发育异常疾病的分子机制 的研究提供一个可靠而全面的参考。 本研究以小鼠成熟COC为研究对象，是因为近年来不断有研究 表明卵母细胞和颗粒细胞之间的信息交流对卵子发育及具有受精和 形成胚胎的潜力都是至关重要的。采用小鼠COC作为研究对象能更 加全面地探讨卵子发育的机理。 本研究结果如下：(1)高重复性和高分辨率小鼠成熟COC蛋白 质二维参考图谱的获得。软件分析显示，24cm银染的蛋白凝胶上有 近2000个蛋白点。点分离清楚，胶重复性好，大部分蛋白点位于相 对固定的位置。(2)通过质谱分析初步确立了105个蛋白点，对应于 90种蛋白质。这些蛋白分别参与(1)细胞信号转导／交流(19．48％)， (2)细胞分裂(3．81％)，(3)基因／蛋白表达(26．67％)，(4)新陈 代谢(20．95％)，(5)细胞结构腿动(10．48％)，(6)细胞／器官防御 (14．29％)，(7)未分类(4．76％)。结论：我们初步构建了小鼠成熟 COC蛋白质二维参考图谱及蛋白质数据库，使我们初步了解了COC 的分子组成，为我们研究卵子发育机制提供了新的线索，并对于我们 研究卵子发育的病理与生理机制有着重要的参考价值，为进一步开展 南京医科大学硕士学位论文COC蛋白质组学研究奠定了基础。 南京医科大学硕士学位论文 COC蛋白质组学研究奠定了基础。 【关键词】双向电