Cytometric Bead Array（CBA）,即微量样本多指标流式蛋白定量.docVIP

Cytometric Bead Array（CBA）,即微量样本多指标流式蛋白定量技术是一个基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法，它能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。日常实验中，常需对溶液体系中的可溶性蛋白进行定量检测，如细胞培养上清或血清中的细胞因子含量的定量分析，由于这些因子的含量较少，低于一般常规方法的检测下限，使用常用的蛋白检测方法western Blot等很难检测。 BD公司利用流式细胞仪可对荧光信号进行级数放大的特性，只需使受检的可溶性因子附着于一些具有近似细胞直径的微粒上，即可对受检样品中的各种可溶性因子进行检测。为此，BD公司开发了的微量样本多指标流式蛋白定量系统，简称CBA系统，通过利用一系列带有荧光标记的微小、分散的微球连结特定的捕获抗体以捕捉溶液系统中的待测物，通过对应各种不同检测物的特异微球上所带有荧光强度不同从而同时测定分析样本中多种可溶性成分的数量。BD的CBA系统的工作原理简单，对应受检系统中的每一个检测指标都设有不同的捕获微球，不同的捕获微球上包被有特异的捕获抗体，并具有不同的荧光强度，通过捕获微球与待测样品溶液混合后，微球上的特异性抗体就与样品（血清、血浆或细胞培养液）中的相应抗原或蛋白结合，最后，加入荧光的检测抗体以形成“三明治”夹心复合物，通过流式细胞样进行荧光检测，便可对样品中的各检测因子的含量进行分析。由于BD的CBA系统中每一个微球都能够提供一个和特定蛋白结合的表面，因此，每个微球就相当于一个单独的、包被好的ELISA板；相对于传统的ELISA技术，荧光信号显色的灵敏度比一般化学发光的灵敏度高，加上利用流式细胞仪对于荧光信号的高敏感性及放大作用，使用这种技术检测未知样品中的指标所需要的样品浓度更低，实验时间更短；另外，常规的ELISA操作，每次只能对一个样本中的一个指标进行检测，各检测子标间的操作需分开进行，往往造成珍贵样本的耗费，如病患者血液中向免疫调节细胞因子包括IFN-γ、TNF-α、IL-2等，通过BD CBA系统，可同时对一个对样品中的多个指标进行检测，这为一些ELISA技术无法满足的实验提供了新的检测手段。现时，BD公司为了满足各种实验所需，符合各种要求的检测试剂盒逐渐增多，随着对CBA检测技术的不断完善，BD的CBA系统的使用者亦不断上升，为了方便BD的CBA系统使用，我们对CBA系统操作中一些常见问题及实验注意事项进行了总结，希望以下的总结，可使客户在以BD的CBA系统在开展实验时，能更有效、更准确、省时的完成实验。 ? Q :　我能不能使用Coulter XL去分析我的CBA数据？A : 虽然CBA试剂盒是为BD FACScan? 和 FACSCalibur? 流式细胞仪设计的，CBA试剂盒也可以通过Coulter XL细胞仪检测，CBA版本1.3以上的软件具有参数兼容性的特征，可以使用非BD公司的仪器分析实验数据，请参阅软件的用户使用指南或者联系技术支持得到进一步的信息。 Q : 实验过程中，除了CBA的分析试剂盒，我们还需要准备什么？A : 除了试剂盒中所包含的成份外，若要进行CBA分析实验，还需要购买BD的微量样本多指标流式蛋白定量技术分析软件(cat. no. 0421CD/ 550065)，此软件主要是用于分析您的实验数据。虽然实验数据的分析可以不使用CBA的特定软件，但是，由于CBA实验中所采集的数据较为繁杂，若不通过专用的CBA软件进行分析，则进行数据分析的时间将显着增加。CBA的专用软件是建立在 Microsoft Excel 的基础上的，用户只需要完全安装MS Excel 98 或者Version 5.0即可安装CBA的专用软件。此外，用户还需要一个488纳米激光器及3个荧光参数的接收的流式细胞仪(eg: BD FACScan? or BD FACSCalibur? cytometer)。 Q : CBA中使用的微珠是由什么做的？所使用到的微珠的平均半径是多少？A :　CBA中使用的微珠的原料是聚苯乙烯，约为7.5?m。 Q : 在CBA分析中我应该使用何种型号的试验管？A : 除了FACSArray外, 我们建议使用12x75 mm, 5 ml的聚苯乙烯管(BD Falcon Cat No. 352008)。 Q :　CBA分析中在进行标准曲线的配制时，有什么需要特别注意的地方？A : CBA试剂盒中所提供的标准样品是蛋白冻干粉，由于大部份的标准样品属细胞因子类的敏感型蛋白，在重悬标准样品成溶液或进行标准样品稀释时，不可采用振动混匀及剧烈吹打的方式处理标准样品，在重悬标准样品成溶液时，在加入溶液后，只需放于室温下平衡15 分钟即可。在进行标准样品的系列稀释时，只需轻轻吹打样品数次即可。否则，由于制成溶液后的标准样品不穏定