流式荧光微球技术高通量筛查血液中多种病毒模型的建立及检测血液感染HBV、HCV的应用研究-微生物学专业论文.docxVIP

西北大学学位论文知识产权声明书 西北大学学位论文知识产权声明书 本人完全了解学校有关保护知识产权的规定，即：研究生在校攻 读学位期间论文工作的知识产权单位属于西北大学。学校有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版。本人允许论文被 查阅和借阅。学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学 位论文。同时，本人保证，毕业后结合学位论文研究课题再撰写的文 章一律注明作者单位为西北大学。篡黧主嚣鎏 雠：监 学位论文作者签名： 缢鲢 指导教师签名： 呈筮堑兰， 硝年易月f日)|心年彳月／日 西北大学学位论文独创性声明 本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，本论文不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 为获得西北大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我 一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的 说明并表示谢意。 学位论文作者签名：；J良蓖硷 伽j年占月f日 霖珏瓣唧缎量瑟娑碍事 两北大学硕士学位论文英文缩写词表 两北大学硕士学位论文 英文缩写词表 英文缩写 英文全称 中文名称 AV．HRP Avidin-HRP 亲和素一辣根过氧化物酶 BNHS Biotin-N-hydroxysuccinimide ester 生物素_N一羟基丁二酰亚胺酯 BSA Bovine sei-Llm albumin 牛血清白蛋白 DMSO Dimethylsulfoxide 二甲基亚砜 DMF N．N-Dimethylformamide 二甲基甲酰胺 EB Ethidiumbromide 溴化乙锭 EDC 1-ethyl一3(3-dimethyaminopropyl) 1-乙基·3-(3-二甲基氨丙基) carbodiimide hydrochloride -碳二亚胺 ELISA Enzyme—linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附测定 Hb Hemoglobin 血红蛋白 HBsAg Hepatitis B su西ace antigen 乙肝表面抗原 HBV Hepatitis B Virus 乙型肝炎病毒 HCV Hepatitis C Virus 丙型肝炎病毒 HⅣ Human hnmunodeficiency Virus 人类免疫缺陷病毒 IgG Immunoglobin G 免疫球蛋白 McAb Monoclonal antibody 单克隆抗体 MES 2．【N．Morphholino]ethane sulfonic acid 2-吗啉代乙基磺酸 MFI Mean Fluorescence Intensity 平均荧光强度 NAT Nueliec acid amplification technology 核酸扩增检测技术 NHS N-hydroxy-succinimide N一羟基琥珀酰亚胺 OD Optical density 吸光度 PBS Phosphate Buffer Saline 磷酸缓冲盐溶液 PcAb Polyclonal antibody 多克隆抗体 PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链式反应 SA．PE Streptavidin-R-phycoerythrin 链霉亲合素一藻红蛋白 TP Treponema Pallidun 梅毒螺旋体 西北大学硕十学位论文中文摘要 西北大学硕十学位论文 中文摘要 因输血导致感染乙肝、丙肝、艾滋、梅毒等疾病的现象在当今社会已经越来 越普遍，引起国家和社会的高度重视。目前最主要的任务就是严格控制对外来血 源的筛查，而传统的ELISA方法检测血液传播疾病的方法仍在不同方面存在局 限性，如检测通量低、需时长、灵敏度较低等。本研究采用流式荧光微球技术， 应用ELISA双抗体夹心法和间接法原理以及生物素一亲和素系统，目的在于建立 一种高通量、快速、灵敏检测HBV、HCV等病毒或病菌血清标志物的方法。 具体研究工作可分为三部分： 1．用Hb．PcAb和羊抗人IgG优化抗体生物素化条件。 2．用Hb和人IgG建立抗原(抗体)与荧光微球的偶联条件。 3．以聚苯乙烯羧基荧光微球为固相载体，将HBsAg．MeAb—S6和HCV Core Ag与不同编号的聚苯乙烯羧基荧光微球偶联；应用ELISA双抗体夹，tl, 法和间接法原理在Luminex．100TM流式荧光微球检测系统下检测人血清 中的I-IBsAg和HCV-Ab。 结果表明抗体在以PBS作为第一次透析液、DMF作为BNHS溶剂的条件下 生物素化效果较好；抗体生物素化后活性保持较好，生物素化效率较