酪氨酯羟化酶基因启动子调控外源性Calbindin D28k特异性表达转基因小鼠的鉴定-人体解剖学与组织胚胎学专业论文.docxVIP

徐州医学院硕士学位论文酪氨酸羟化酶基因启动子调控外源性 徐州医学院硕士学位论文 酪氨酸羟化酶基因启动子调控外源性 Calbindin D一28k特异性表达转基因小鼠的鉴定 中文摘要 目的检测酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase，TH)基因启动子调控外源性 Calbindin D-28k特异性表达转基因小鼠脑内不同区域钙结合蛋白D．28k(Calbindin D．28k，CaBP)特异性表达情况，以验证已建立的转基因小鼠系。 方法提取转基因小鼠DNA，聚合酶链式反应(polymerase chain reaction， PCR)检测转入的外源性Calbindin D-28k。筛选出携带该目的基因的阳性小鼠， 扩群。免疫荧光观察转基因小鼠和正常小鼠的嗅球(Olfactory Bulb，OB)、黑 质(SubstantiaNigra，SN)、海马(hippocampus，Hi)、小脑(cerebellum，CB) 及大脑皮层(cerebral Cortex，CC)中CaBP阳性细胞的数量和与TH共表达情况。 选取稳定表达外源性Calbindin D-28k小鼠设为转基因组(风)，未表达外源性基 因的小鼠设为转基因阴性对照组(nTg)，野生型小鼠为正常对照组(wild)。蛋白 质印迹方法检测三组小鼠上述五个区域CaBP的表达量。 结果PCR检测4只转基因阳性原代鼠的子代，结果显示，2只原代鼠能稳 定遗传外源性Calbindin D-28k。取2号原代鼠F1代作为种子，扩群繁殖，F3、 F4代中外源性Calbmdin D-28k都能稳定遗传，转基因小鼠数量达到35只，用2 号原代鼠初步建立转基因小鼠系。 进一步检测转基因小鼠外源性Calbindin D-28k在脑内不同部位的特异性表 达，免疫荧光结果显示，转基因小鼠嗅球、黑质的CaBP阳性细胞数显著多于正 常鼠俨0．05)。而海马、小脑、大脑皮层的CaBP阳性细胞数与正常小鼠无明显 差异。 蛋白质印迹结果显示，转基因组小鼠嗅球及中脑黑质部CaBP表达量显著高 于转基因阴性组和正常组小鼠(尸0．05)。而海马、小脑、大脑皮层的CaBP表达 徐州医学院硕士学位论文量与转基因阴性组和正常组小鼠无明显差异。转基因阴性组小鼠上述五个区域 徐州医学院硕士学位论文 量与转基因阴性组和正常组小鼠无明显差异。转基因阴性组小鼠上述五个区域 CaBP的表达量与正常组小鼠无明显差异。 结论转基因小鼠能稳定遗传外源性基因；外源性Calbindin D-28k在其嗅 球、黑质致密部特异性过表达；成功建立转基因小鼠系。 关键词转基因小鼠；钙结合蛋白D．28k基因；酪氨酸羟化酶 徐州医学院硕士学位论文Identification 徐州医学院硕士学位论文 Identification of transgenic mice apply tyrosine hydroxylase gene promoter to adjust specifically expressing ectogenic Calbindin D-28k Abstract ’ Objective To detect calbindin D一28k(CaBP)in the distinct sector of transgenic t mice which applied tyrosine hydroxylase(TH)gene promoter to adjust specifically expressing ectogenic Calbindin D一28k．And to authenticate the transgenic mouse lines has been established． Methods Extract the transgenic mice DNA,and detect exogenous Calbindin D-28k by polymerase chain reaction(PCR)．Choice out the transgenic mice which expressing exogenous target gene，expand the transgcnic mice group．We observed TH and CaBP positive cells by Lrnrnunofluorescence in olfactory bulb(OB)，substantia nigra(SN)，hippocampus(Hi)，cerebellum(CB)and cerebral Cortex(cc)．And then divided the mice into three groups：