核酸化学02 - 2012生物化学.pptVIP

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2019-05-22 发布于江西
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核酸化学02 - 2012生物化学.ppt

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DNA、RNA都是极性化合物，都微溶于水，不溶于乙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂；核酸的钠盐比自由核酸易溶于水；核酸、核苷酸、碱基在水中的溶解度依此减小；不同核酸在盐溶液中溶解度不同；核酸的酸碱性质核酸的碱基、核苷、核苷酸均可发生解离 1、酸水解 DNA或RNA在酸性条件下都可被完全水解,生成戊糖(核糖和脱氧核糖）、碱（嘌呤碱和嘧啶碱）及磷酸；糖苷键比磷酸酯键易水解；嘌呤碱的糖苷键比嘧啶碱的糖苷键易水解；嘌呤碱与脱氧核糖的糖苷键最易水解。如：用98－100％的甲酸密封加热处理核酸至175?C ，2小时，DNA/RNA都完全水解。用三氟乙酸于155?C加热DNA60分钟，或处理RNA80分钟，此时嘧啶碱的回收率显著提高。由于核苷酸是两性电解质，在不同pH的溶液中解离程度不同，在一定条件下可形成兼性离子 pH pH pH 核苷酸的滴定曲线：酸碱滴定可用于确定参与酸碱反应的基团的性质。天然DNA与变性DNA的滴定曲线是不同的，双链解开后碱基即可参与酸碱滴定。 DNA的酸碱滴定曲线对了解DNA的酸碱变性很有帮助。核酸的紫外吸收---由碱基的共轭体系决定核酸的紫外吸收应用： 1、不同核苷酸有不同吸收特性，可用紫外分光光度计进行定性、定量测定。 1 OD相当于：50μg/ml DNA 40μg/ml RNA 2、确定所提取的核酸是否纯品。 1）DNA： ≈1.8 纯品 OD260/OD280 ＞ 1.8 RNA 污染＜ 1.8 pro 污染 2）RNA： OD260/OD280 ≈2.0 纯品 DNA变性 DNA复性五.核酸的变性与复性（一）DNA的变性（1）DNA变性后的表现：DNA溶液粘度降低，沉降速度加快,有增色效应(由于碱基暴露,DNA A260增加)。（2）Tm值：DNA的热变性是一个跃变过程,当A260光吸收达到最大值的一半时,所对应的温度称为熔点或熔解温度：Tm （二）RNA的变性： RNA只有局部双螺旋，变性表现不如DNA明显，变性曲线不陡，Tm值较低。但tRNA双螺旋区较多，Tm值较高，变性曲线较陡（三）DNA的复性：变性的DNA在适当条件下，两条彼此分开的链重新缔合成为双螺旋结构，许多物化性质得到恢复的过程，谓之复性复性的条件：1. 缓慢冷却 2. DNA的浓度越大，复性越快 3. DNA的片段越大，复性越慢 4. DNA的重复序列越多，复性越快复性反应的速度(Co t1/2)：Co为变性DNA复性时的初始浓度,以核苷酸的摩尔浓度表示；t为时间，以秒表示。Cot1/2表示复性一半的摩尔浓度