实验一--补体结合实验.docVIP

实验一 补体结合实验 实验原理：补体无特异性，可与任何抗体抗原复合物结合而被激活，但不能与单独的抗体或抗体结合。 补体结合试验是一种有补体参与，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应体系。绵羊红细胞与溶血素结合后可激活补体，导致红细胞破坏，出现溶血现象。参与补体结合反应的五种成分可分为两个系统：(1)待测系统，已知抗原（或抗体）、待测抗体（或抗原）；（2）指示系统，SRBC、溶血素。待检测系统与补体作用后，加入指示系统，若不出现溶血，表示待测系统中的抗原抗体相对应；两者特异性结合形成抗原抗体复合物结合并消耗了补体，无游离的补体与指示系统结合，故不溶血，为补体结合试验阳性。反之，若出现溶血，则为补体结合试验阴性。 实验方法： 1.取五支试管，依次做好标记，放在试管架中。 2.按照下表加样。 实验结果： 结果分析：试管1、5没有发生溶血现象，为补体结合试验阳性，说明其中的抗体抗原发生了特异性结合，消耗了补体；试管2、3、4发生溶血现象，为补体结合试验阴性，说明抗体抗原不对应，没有消耗补体。 1.羊血用前轻轻摇匀，避免剧烈正当引起溶血。 2.各种试剂的吸管不要混用。 3.补体的性质较不稳定，低温保存，加样时再从冰箱里取出。 4.水浴时避免水滴滴进试管。 5.本实验影响因素很多，对照组的反应情况是否正常是判断实验可信度的参照。 实验二 人外周血单个核细胞分离 实验原理：常用来分离人外周血单个核细胞的分离液是由聚蔗糖和泛影葡胺按一定比例混合制成。它分子量大又无化学活性，20摄氏度时比重约为1.077kg/L，淋巴细胞和单核细胞比重略小于分层液，为1.070kg/L左右。而粒细胞和红细胞比重大，为1.092 kg/L左右。通过离心，使一定比重的细胞按相应密度梯度分布，淋巴细胞和单核细胞位于分离液的上层，而粒细胞和红细胞沉于离心管的管底，从而将淋巴细胞和单核细胞等单个核细胞分离出来。 实验方法： 1.抽取1.5ml静脉血至肝素抗凝管，加入1.5ml Hank’s液 2.混匀后取3ml稀释液，沿试管壁缓慢加入到2ml分离液中。2000rpm,离心20min。 3.小心吸取淋巴细胞层，加入2ml Hank’s液，2000rpm,离心10min。 4.弃上清，加入2ml Hank’s液。2000rpm,离心10min。 5. 弃上清，加入2ml Hank’s液，细胞计数。 实验结果：经淋巴细胞分离液梯度离心后试管中可见明显血细胞分层。由上至下依次为：血浆层、淋巴细胞单核细胞层、分离层、红细胞粒细胞层。镜下观察淋巴细胞，但并未观察到明显细胞。 结果分析：我们最后没有观察到应有的实验现象，实验失败。原因为我们在向分离液中加稀释液时，没有用吸管吸取，而是直接选择倾倒，但结果倾倒速度过快，导致两液体混合，没有分清界线，故导致最终实验失败。 注意事项：1、抽取人外周静脉血的时候要注意无菌操作。还应注意生物安全保护，避免血源性传染病。 2.操作全程应尽可能在较短时间内完成，以减少死细胞的数目。 3.一定要用水平砖头的离心机，且离心机转速的增加和减少要均匀、平稳，以保持细胞界面的清晰。 4.注意血制品的污染。 5、注意加入Hank’s液时不要打破界面。