月季花药培养讲义.pptVIP

花粉发育过程 实例一： 关于被子植物花粉发育的说法，不正确的是（ ） A、花粉粒是在花药中的花粉囊里形成的 B、被子植物精子的形成是直接减数分裂的结果 C、被子植物的花粉的发育要经历四分体时期、单核期、双核期等阶段 D、花粉粒在发育过程中，核先位于细胞一侧，再移到细胞中央 1、材料的选择 2、培养基的组成（MS培养基+不同比例的激素） 3、亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种密度等对诱导成功率都有一定影响 实验操作 一、材料的选取 二、材料的消毒 三、接种和培养 实验操作 （一）材料的选取 1、选择花药一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。 2、确定花粉发育时期最常用方法：醋酸洋红法；焙花青－铬矾法。 2）、器官发生途径： 由愈伤组织或外植体诱导形成不定根或不定芽，再获得再生植株的方法。 二、相关知识 二、相关知识 二、相关知识 1、酒精处理 ①花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒，立即取出。 ②无菌水清洗 ③无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 二、材料的消毒 2、消毒液处理 ① 放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~4分钟（也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液） ② 无菌水冲洗3~5次 用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。 二、材料的消毒 花蕾 （70％酒精） 大约30s （无菌水） 清洗 （无菌吸水纸） 吸干水分 （0.1％氯化汞溶液） 2～4min （无菌水） 冲洗 在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药 ②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成 立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。 1、剥取花药 ①勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织 2、接种 注意： 三、接种和培养 ①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 3、培养 ②培养：一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体 长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株 ③注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。 在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化（主要原因是营养核和生殖核融合造成的） 4、鉴定和筛选 选材是否恰当 选材是否成功是花药培养成功的关键。应学会通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。 课题成果评价 课题成果评价 课题成果评价 课题成果评价 无菌技术是否过关 如果出现了污染现象，说明某些操作步骤，如培养基灭菌、花蕾消毒或接种等有问题。 课题成果评价 接种是否成功 如果接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状体，花药培养的第一步就成功了。要适时转换培养基，以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株。 课题成果评价 花药培养技术 植物组织培养技术 不同点 相同点 项目 植物组织培养技术与花药培养技术的异同点 离体的植物组织经脱分化形成愈伤组织，再分化成丛芽，诱导出根，然后进行移栽。 外植体为体细胞，染色体数无需加倍。 (无性生殖） 取材为花药，培养的为单倍体幼苗，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为纯种。（有性生殖） 课后练习1 F2代紫色甜玉米的基因型组成可能为Aasusu或AAsusu。如果运用常规育种方法，将F2代中的紫色甜玉米与白色甜玉米（aasusu）进行测交，可以选择出基因型为AAsusu纯种紫色甜玉米。但这种方法比较繁琐，耗时也较长，需要至少三年的选种和育种时间。 激素 激素种类和浓度对花药培养的影响 花药壁分化程度高，重新分裂需要较高的激素浓度才能启动。因此，花药培养基的激素水平要相对较低才能抑制二倍体细胞的分裂。 确定适宜的激素浓度，以促使花粉细胞分裂的同时又抑制花药二倍体细胞分裂是成功获得单倍体的关键。 知识拓展： 诱导培养： 多数植物用2,4-D 和KT，但浓度不同。有些植物用BA和NAA。 2,4-D 和KT浓度对诱导单倍体的频率有较大影响，高浓度2,4-D主要诱导花药形成愈伤组织，不能形成胚状体，所以2,4-D激素水平要相对较低。 知识拓展： 一、被子植物的花粉发育 百合鳞叶培养 外植体器官发生途径 概 述 * 3.2 月季的花药培养 一、被子植物的花粉发育 1、被子植物 子房