细胞培养基本方法：从体内到体外.pptVIP

;体外培养（in vitro culture）的概念;体外培养技术的应用;体外培养的优点;体外培养的基本原理与技术;一、从体内生存环境到体外生长条件;一、从体内生存环境到体外生长条件;１、水（water） ２、无机盐（inorganic salt） ３、葡萄糖（glucose） ４、维生素（vitamin） ５、氨基酸（amino acid）;１、温度（temperature） ２、氧和酸碱度 （oxygen and power of hydrogen） ３、体液渗透压 （osmotic pressure of humor） ４、细胞之间的相互联系;温度对细胞生存的影响;低温(hypothermy);慢速冷冻：当细胞慢慢冷冻至-40℃时，细胞外 的冰晶会通过细胞的孔隙进入细胞内 引起冰晶。;１、温度（temperature） ２、氧和酸碱度 （oxygen and power of hydrogen） ３、体液渗透压 （osmotic pressure of humor） ４、细胞之间的相互联系;２、氧和酸碱度（oxygen and power of hydrogen）;１、温度（temperature） ２、氧和酸碱度 （oxygen and power of hydrogen） ３、体液渗透压 （osmotic pressure of humor） ４、细胞之间的相互联系;３、体液渗透压（osmotic pressure of humor）;１、温度（temperature） ２、氧和酸碱度 （oxygen and power of hydrogen） ３、体液渗透压 （osmotic pressure of humor） ４、细胞之间的相互联系;４、细胞之间的相互联系;细胞增生的接触性抑制;１、体外培养实验室 ２、体外培养实验室的设备和器具 ;１、体外培养实验室;１、体外培养实验室;;１、体外培养实验室 ２、体外培养实验室的设备和器具 ;２、体外培养实验室的设备和器具;;美国SHELLAB CO2培养箱;;;（１）大型设备和仪器;真空式过滤器;正压式不锈钢滤器;针头式滤器;（１）大型设备和仪器;;;细胞过滤器;１、水与平衡盐溶液(balanced salt solution，BSS) ２、培养液(culture solution) ３、其它常用液;１、水与平衡盐溶液;１、水与平衡盐溶液;蒸馏水的贮存也很重要，蒸馏水应贮存于密封的清洗干净的玻璃瓶内，最好用龙头瓶贮存，用时由瓶下端的玻璃龙头放水。 尽量少开启瓶口或从瓶口倒水，以防周围不洁的环境和空气污染水。 制备的水存放时间不宜太长，一般不超过2周，最好现制现用。若将所制备的蒸馏水经高压蒸汽消毒，可密封存放较长时间。;由缓冲剂配制成的溶液，在加入一定量的酸或碱时其氢离子浓度改变甚微或几乎不变，此种溶液称为缓冲（溶）液(buffer solution)。;１、水与平衡盐溶液;平衡盐溶液:;平衡盐溶液:;１、水与平衡盐溶液;２、培养液(culture solution);２、培养液;２、培养液;胚胎浸出液： （略）;１、水与平衡盐溶液;２、培养液;２、培养液;２、培养液;１、水与平衡盐溶液;２、培养液;２、培养液;１、水与平衡盐溶液 ２、培养液;３、其它常用液;３、其它常用液;３、其它常用液; 2) EDTA溶液：;（2）消化酶抑制剂（enzyme inhibitor）;３、其它常用液;３、其它常用液;实验课时间：从第14周开始 实验课地点：104馆三楼东边;１、无污染的 气、液相环境;１、无污染的气、液相环境;１、无污染的气、液相环境;１、无污染的气、液相环境;１、无污染的 气、液相环境;２、温度;高温的影响： 温度上升不超过39℃时，细胞的代谢强度与温度成正比。 细胞在39～40℃中培养1h，即会受到一定损伤，但仍能恢复。当在41～42℃的温度条件下培养1h，细胞则会受到严重损伤，但不致于全部死亡，部分仍可能恢复。 当温度达43℃以上时，细胞大多死亡。;低温的影响： 对于温度低于正常范围的环境，总的来说，只要温度不低于0℃时，低温只能抑制细胞代谢，并无伤害作用。 细胞在25～35℃条件下仍能生存和生长，但速度缓慢。 若将培养的细胞放在4℃下数小时后，再置37℃培养，细胞仍能继续良好地生长。细胞代谢随温度降低而减缓。 温度降至冰点以下时，细胞胞浆结冰可以导致细胞死亡。;１、无污染的 气、液相环境;３、生长基质;在培养器皿表面包被的这层能改善生长表面的特性、促进细胞黏附和贴壁的物质，即生长基质（growth substratum）。 生长基质物质主要是一些细胞外基质成分。;（六）清洗和消毒;1、培养用具的清