镍钛合金表面沉积氮化钛的生物相容性研究-第三军医大学学报.DOCVIP

张贵：男，贵州省六盘水人，工程师,主要从事生物材料生物性能研究 Tel:0755Email: zhanggui@ 纳米结构TiN陶瓷涂层对NiTi合金生物相容性的影响 张贵1，张德元1，何伶俐2，祁凤君1 1先健科技（深圳）有限公司研发中心，深圳 518057 2贵州省六盘水市人民医院检验科，六盘水 553000 摘要：目的：评价沉积纳米结构TiN陶瓷涂层对镍钛形状记忆合金生物安全性的影响，为生物医用纳米结构陶瓷涂层材料安全性提供依据。方法：分别通过溶血试验、血小板粘附实验、体外细胞毒性测试，初步评价镍钛合金表面纳米陶瓷涂层的生物安全性。结果：镍钛合金表面纳米陶瓷涂层溶血率、血小板粘附、细胞爬附均好于镍钛合金，无细胞毒性。结论：表面纳米陶瓷涂层可以改善镍钛合金的生物安全性。 关键词：生物相容性；细胞毒性；NiTi合金；氮化钛 中图分类号 R318；文献标识码:B 0引言 镍钛形状记忆合金（NiTi）不仅具有良好的力学性能、耐腐蚀性和生物相容性，其独特的形状记忆效应和超弹性使得其被广泛应用于植入性医疗器械的制备，如心脏缺损封堵器、血管内植入物、接骨器件、口腔科器械等。但镍钛形状记忆合金含镍一般为49.8%-50.6at%，植入体内会缓慢的释放出镍离子，导致血镍浓度升高到正常的3倍[1]，并富集于植入部位附近组织[2]；而镍离子积聚到一定浓度后有诱发毒性效应，发生细胞破坏和炎症反应，对生物体有致畸致癌的潜在危险[3、4]。所以人们通过各种表面处理来改善镍钛合金的生物相容性；TiN表面涂层改性是改善NiTi合金临床医学领域应用效果的有效捷径[5]。但单一的TiN涂层不能随基体做较大的变形，且阻碍基体变形。所以人们尝试Ti/TiN交替涂层[6]，简单的交替涂层太厚依然存在阻碍变形或变形时脱落的问题。 本文通过对NiTi合金表面沉积纳米结构生物陶瓷涂层（Ti/TiN），在不影响基体的形状记忆或超弹性效应的前提下，通过减少镍离子释放来改善NiTi合金中镍离子对人体的危害。目前，材料器械生物安全体外评价方法较多，其中应用最多的是细胞相容性和血液相容性[7、8]，本文通过体外细胞毒性实验和血液相容性实验初步探索涂层对镍钛合金生物安全性的影响，为这一材料后续的生物医用提供依据。 1实验 1．1实验材料和方法 1．1．1 NiTi合金表面处理和特性 选用美国Johnson Matthey生产的含镍50.6at%的NiTi合金丝做为基底,共40段，规格：直径0.26mm，长10mm,分两组，20段用三氯乙烯和酒精清洗后，采用增强离子沉积技术，在其表面沉积总厚度1μm的Ti/TiN薄膜,剖面形貌用扫描电镜（SEM）观察，并用X射线能量色散谱仪（EDS）做穿过界面的线扫描；另一组20段NiTi丝表面未经处理 1．1．2细胞相容性实验 用0.25%胰蛋白酶消化已传代三代的大鼠心肌细胞（由上海生命科学研究院细胞库提供），DMEM完全培养液稀释成104/mL的细胞悬液（DMEM购于美国Gibco公司，含10%小牛血清1%双抗），将两组样品各5段用超声清洗仪清洗20min，生理盐水冲洗、75%的酒精消毒，放在紫外线下照射40min后。分别放入两个细胞培养皿中，同时加入等体积等密度的大鼠心肌细胞悬液，置于37CO5%的二氧化碳培养箱中培养，于第五天时取出样品，PBS冲去样品表面的细胞培养液，各取1段用2%的戊二醛固定10min，乙醇系列脱水、丙酮脱醇、空气中干燥、喷金后扫描电镜（Jeol6300Lv）下观察细胞在两组材料表面的数量及形态；将余下未经固定的的两组样品，每段用0.5mL0.2%的胰酶洗脱表面爬附细胞，并计数。 1．1．3血液相容性实验 1．1．3．1血小板粘附实验 将20mL的新鲜抗凝血（3.8%枸橼酸钠，血液为1：9）3000转/分离心20min获得富含血小板血浆（PRP）。分别取5段两组样品，生理盐水清洗，同时浸入PRP血浆中，置于37Co温箱60min后取出，用PBS溶液轻轻漂洗表面多余的PRP，用2%的戊二醛固定，系列脱水、脱醇、空气中干燥、喷金、扫描电镜下观察血小板贴附于材料表面形态和数量。 1．1．3．2溶血实验 用新鲜抗凝血5mL，加生理盐水15mL稀释,得稀释4倍的稀释血细胞悬液(血红蛋白量约为40g/L)。将两组样品各10段，用生理盐水冲洗数次后，各加入5mL的稀释血液，置于37CO的培养箱中保温培养48h。阴性对照直接用稀释的血液，阳性对照用蒸馏水将新鲜抗凝人血做4倍的稀释，与实验样品同样操作，然后以300r/min速度离心15min，取上清液200μL（阳性对照20μL）按照氰化高铁血红蛋白法（HiCN）操作，紫外分光光度计（UV1101）读取500nm到650nm的吸光度曲线，并用540nm处各组