狂犬病病毒不同毒株的生物学特性和狂犬病暴露后免疫动物模型研究-病原生物学专业论文.docxVIP

中国食品药品检定研究院硕士学位论文版权声明 中国食品药品检定研究院硕士学位论文 版权声明 - - 73 - 万方数据 版权声明 任何收存和保管本论文各种版本的单位和个人，未经本论文作者同意，不得 将本论文转借他人，亦不得随意复制、抄录、拍照或以任何方式传播。否则，引 起有碍作者著作权之问题，将可能承担法律责任。 中国食品药品检定研究院学位论文 原创性声明和使用授权说明 原创性声明 本人郑重声明： 所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文使用授权说明 本人完全了解中国食品药品检定研究院关于收集、保存、使用学位论文的 规定，即： 按照院要求提交学位论文的印刷本和电子版本； 院有权保存学位论文的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务； 院可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文； 院可以公布论文的部分或全部内容，并可将论文编入有关数据库进行检索。 （保密论文在解密后遵守此规定） 论文作者签名： 导师签名： 日期： 年 月 日期： 年 月 万方数据 万方数据 目 录 第一部分 狂犬病病毒不同毒株的生物学特性研究 1 中文摘要 1 英文摘要 2 前言 4 材料和方法 6 1、实验材料 6 2、实验方法 12 实验结果 15 1、直接免疫荧光实验结果 15 2、细胞病变实验结果 16 3、空斑形成实验结果 18 4、小鼠毒力实验结果 22 讨论 24 第二部分 金黄地鼠作为狂犬病暴露后免 疫动物模型的可行性研究及其初步应用 25 中文摘要 25 英文摘要 26 前言 28 材料和方法 32 1、实验材料 32 2、实验方法 34 实验结果 39 1、金黄地鼠作为狂犬病暴露后免疫动物模型可行性研究结果 39 2、金黄地鼠作为狂犬病暴露后免疫动物模型的初步应用结果 43 讨论 51 全文总结 53 参考文献 54 综述 59 英文缩略词 70 致谢 71 版权声明 73 Ⅱ 中国食品 中国食品药品检定研究院硕士学位论文 第一部分 - - 1 - 万方数据 第一部分 狂犬病病毒不同毒株的生物学特性研究 研究生：汤重发 导 师：俞永新 院士 中文摘要 狂犬病是由狂犬病病毒引起的人兽共患病，通常由感染了狂犬病病毒的疯动 物咬伤或抓伤而感染人，目前尚无有效的治疗方法，死亡率为 100%。狂犬病疫 苗是控制人和动物狂犬病的关键因素之一。目前世界上用于人用及兽用狂犬病疫 苗生产的毒株种类较多。对于各毒株的生物学特性，尤其是其致病性和对细胞的 感染性目前缺乏较为系统的研究。本研究选取 2 株标准攻击毒（CVS、CVS-11） 和 4 株疫苗株（PV、4aG、Flury-LEP、CTN-1）共 6 株狂犬病病毒固定毒，着重 研究这 6 株固定毒对动物的致病性和对细胞的感染性。实验以小鼠脑内和肌肉途 径接种比较不同毒株的致病性；研究并建立 HEPES(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)诱导的 空斑形成技术测定病毒空斑形成单位（Plaque-forming Unit，PFU）和细胞病变 感染技术测定病毒感染滴度（CCID50），并用以比较不同毒株的病毒滴度，空斑 实验及细胞病变实验同时在 Vero 及 BHK-21 细胞上进行，以确定敏感的细胞系； 实验同时以常规的直接免疫荧光法（Direct Immunofluorescent Assay，dFA）测定 的 FFU 作为滴度参考值。 结果显示不同固定毒株对 10-12 g 小鼠的脑内致病力普遍很高，但肌肉毒力 普遍降低，相差在 3.0-5.0 lgLD50 之间。用二种新的方法（PFU 和 CCID50）测定 不同毒株的病毒滴度与 dFA 法测定的结果比较除个别株外无明显差别，如 CVS-11、4aG、PV 株用三种方法测定的滴度均在 7.1-7.9 lg 之间。 实验表明用 dFA 法测定病毒滴度的结果与小鼠脑内测定的结果有可比性， 用以替代小鼠脑内法测定疫苗原液内病毒滴度是可行的。二种细胞感染法更适宜 采用 BHK-21 细胞，二种方法测定的病毒滴度操作简便，无需贵重仪器和昂贵试 剂，可以更广泛地应用于狂犬病病毒和疫苗发展的研究，也这为狂犬病病毒致病 力研究及疫苗的质量控制研究奠定基础。 关键词：狂犬病病毒；细胞病变；蚀斑形成；4-羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES） - - PAGE 2 - 万方数据 The biological characteristics of di