辣椒叶片cDNA文库构建研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

福建农林大学硕士学位论文中文摘 福建农林大学硕士学位论文 中文摘 要 本研究利用从我省辣椒地方品种资源中筛选出的抗病品种为材料，在 优化了其RNA提取方法的基础上，构建辣椒叶片响应uv辐射而表达的 cDNA文库，主要结果如下： (1)以经过uv辐射处理后的辣椒叶片为研究材料，优化了辣椒RNA 提取方法．在该方法下所提取的RNA质量，能够很好的满足构建文库的 要求。 (2)利用MMLV反转录酶把总RNA中的mRNA反转录成cDNA， 用特异引物进行LD-PCR扩增合成双链cDNA：用CHROMA SPIN一400 Column对cDNA进行分级分离，去除小于500bp的cDNA片段；用带有 粘性末端的双链eDNA与^TriplEx2载体连接，利用^噬菌体包装蛋白对 合成的双链eDNA进行体外包装，包装产物侵染叵coli XL—Blue获得eDNA 文库。该eDNA文库的滴度为1．191×106，克隆数为1．112×106，扩增后 的滴度为1_532×10”，插入片段平均大小在lkb左右，蓝白斑筛选证实 其重组率大于80％。同时，由于反转录过程中采用附加序列的方法使全长 mRNA得到反转录，所以得到的eDNA是完整的，有利于各种基因的全长eDNA 的获得。 关键词：uv，辣椒，RNA提取，eDNA合成，eDNA文库 掭建寝捧大学硕士学谴论文Abstract 掭建寝捧大学硕士学谴论文 Abstract The cDNA library of pepper leaves treated with UV radiation was constructed on the basis ofoptimized total RNA extraction mathod，The main results were as following： 1)The total RNA extraction mathod was optimized with the pepper leaves treated with UV radimion．and the total RNA extracted through the optimized mathod could best meet the requirement of contructing the eDNA library． 2、The cDNA was synthesized from the total RNA with the one point mutant of Moloney murine leukemia virus(MMLV)reverse transcriptase，and the eDNA was further size—fractioned by CHROMA SPINl400 Column to remove the fraction shorter than 500bp．硼№ds cDNA was cloned into the^TriplEx2 vector and the resulting ligating matarial was ^·phage packaged。’nle unamplied eDNA library was titered using E．coli XL．Blue。 and it turned out that the titer of the eDNA library was l。191× 106,the number ofthe coloniesis 1．112×106,the titer ofthe amplied cDNA library was 1．532×10lo,and the recombinant efficiency was OVer 80％ throu酶whlte／blue screening。 Key Words：UV，pepper，RNA extraction，cDNA synthesize，eDNA 1ibrary 2 搐建农林太举疆士学证论文1．1本科究翡立蘧禳攘 搐建农林太举疆士学证论文 1．1本科究翡立蘧禳攘 熟飘层耗损导致地畿Uv辐射增强己成为当今世界重要的环境阀臌之一．UV 辐射增强对植物的可能彩晌致其可戢的作用机制已引起植物科学工{馨者们的广泛戈 注，，弗在运一、二卡牮避行了大量酶研究+鲭暴表鹈；～方蠢，UV辐射增强霹褴 物形态、生理、生化嵴不同层次造成伤害，影响植物的生长发育和栽培植物产鼙的 形成；另一方面．植物(作物)在UV辐射增强的作阁下，也发生形态上、生理羊¨ 生纯上妁避痤，班减少Uv辐射对棱物躺危害，增强熬程强uV辐射F桷生存扭会* 碗如，在Uv照瓣佟耀下，植鐾缡魏内发生售芎转母、存关陵繇