淋巴瘤B细胞多药耐药细胞系的建立及耐药机制研究-临床医学专业论文.docxVIP

2004届南开大学医学院七年制临床医学专业硕士毕业论文淋巴瘤B细胞多药耐药细胞系的建立及耐药机制的研究 2004届南开大学医学院七年制临床医学专业硕士毕业论文 淋巴瘤B细胞多药耐药细胞系的建立及耐药机制的研究 研究生：南开大学医学院97级苏改秀 指导教师：杨纯正教授 摘要 目的：本研究针对人Burkitt淋巴瘤细胞Raji细胞，建立对抗癌药物阿霉素 (Doxorubicin，Dox)耐药的细胞株，分析其对于其它化疗药物是否存在交叉耐 药，研究耐药的主要分子机制，并初步探讨抗CD20单克隆抗体对耐药细胞的作 用是否通过bcl．2途径。 方法：Raji细胞长期生长在阿霉素环境中，药物浓度随培养时间缓慢递增，逐步 诱导细胞耐药；应用MTr法检测其耐药倍数及耐药谱；血细胞计数法计算细胞 倍增时间；流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡；RT-PCR方法探讨产生耐药性 的分子机制及抗CB20单克隆抗体的逆转作用。 结果：建立了Raji多药耐药细胞株，耐阿霉素倍数约为10倍，对其它几种化疗 药物存在交叉耐药，耐药倍数分别为：耐HHT 11．5倍、耐VPl6 56倍、耐VCR 67．6倍、耐DDP 2．3倍；耐药细胞一般形态与敏感细胞无明显差异；细胞倍增 时间与敏感细胞相比也未见明显差异，分别为耐药细胞14．711，敏感细胞14．4h； 细胞周期分布有所不同，耐药细胞s期增高，提示其DNA合成活跃；耐药细胞 中编码多药耐药蛋白PgP的多药耐药基因(Multi-drug resistance gene 1，mdrl) 表达未见升高，雨编码多药耐药相关蛋白MRP的多药耐药相关基因(Multi-drug resistance associated gene，mrp)和抗凋亡基因bcl-2的表达均升高，给予抗C020 单克隆抗体F(ab’)2片段处理48小时后，bcl-2表达未见明显下降。 结论：通过阿霉素诱导建立了一株多药耐药的人淋巴瘤细胞株，其耐药机制包括 mrp及bcl一2的表达升高；扰CD20单克隆抗体V(ab’)2片段对于耐药细胞bcl-2表 达水平无明显影响，提示抗体作用可能通过bel．2以外的其它途径。 关键词：淋巴瘤多药耐药多药耐药相关基因bcl一2 CD20 2004届南开大学医学院七年制临床医学专业硕士毕业论文Establishment 2004届南开大学医学院七年制临床医学专业硕士毕业论文 Establishment of B cell multi-drug resistance model in lymphoma and its molecular mechanisms Degree Candidate：Su Gal-Xiu Tutor：Yang Chun-Zheng Abstract objectives：To establish a multi-drug resistance cell line of Raji and investigate possible mechanisms ofacquired resistance． Methods：Human lymphoma Raji cells were cultured in gradually inerensing concentration of Doxorubiein ov盯half a year to gain the resistance line．MTT and RT-PCR were used to study the possible mechanisms ofthe resistance． Results：We have established a multi-drug resistance cell line of Raji wim about 1 0一如ld resitance to Doxorubicin compared岍Ⅱl the corresponding sensitive cell line． OtheTIllore，we have found a broad spectrum of drug resistance to other anticancer agents such as HHT,VPl6，VCR and DDP．In terms of the cell appearance and the proliferation，it has no obvious difference bt!twean the resistance and sensitive eell line．The expression level of the Imp and bcl-2 gene has inereased clearly in resist