山橿有效部位的富集纯化及质量控制研究-生药学专业论文.docxVIP

目 录 摘 要 1 ABSTRACT 2 前 言 4 第一章 质量控制方法研究 5 第一节 球松素含量测定方法 5 1 材料、试剂与仪器 5 2 方法与结果 5 3 结果验证 8 4 小结 9 第二节 总黄酮含量测定方法 10 1 材料、试剂与仪器 10 2 方法与结果 10 3 结果验证 13 4 小结 13 第三节 综合评价方法 14 1 数据标准化 14 2 主观赋权法综合评价法 14 3 小结 14 第二章 制备工艺研究 15 第一节 提取工艺条件研究 15 1 试剂与仪器 15 2 方法与结果 15 3 工艺验证 18 4 小结 18 第二节 纯化工艺条件研究 19 1 试剂与仪器 19 2 方法与结果 19 3 小结 24 第三章 有效部位的质量控制研究 25 第一节 HPLC 指纹图谱研究 25 1 试剂与仪器 25 2 方法与结果 25 3 指纹图谱选择及共有指纹峰的标定 30 4 已知成分在指纹图谱中的指认和描述 34 5 小结 34 第二节 一测多评法测定主要有效成分含量研究 36 1 试剂与仪器 36 2 原理 36 3 方法与结果 37 4 小结 45 第四章 综合分析与讨论 46 致 谢 48 参考文献 49 附录 1 纯化部位 PDA 全波长检测图谱 50 附录 2 综述大孔吸附树脂富集纯化黄酮类化合物工艺研究概况 51 摘 摘 要 山橿有效部位的富集纯化及质量控制研究研究 山橿有效部位的富集纯化及质量控制研究研究 PAGE PAGE 13 PAGE PAGE 10 摘 要 目的： 建立山橿有效部位的富集纯化工艺和质量控制方法。 方法： 建立运用 HPLC 法测定球松素含量和紫外分光光度法测定山橿总黄酮含量 的方法，运用统计分析软件 spss17.0 对测定结果进行综合评价；运用正交试验方法确 立有效部位的最优提取工艺；通过考察大孔吸附树脂类型、上样条件、洗脱条件等主 要指标，优选纯化工艺；选取 10 批纯化样品，建立山橿有效部位 HPLC 指纹图谱，运 用“一测多评”法同时测定其中 4 种主要成分的含量，建立有效部位的质量控制方法。 结果： （1）球松素 HPLC 含量测定条件为：检测波长 297nm，甲醇：水梯度洗 脱，回归方程为 Y=2896600X+50479（R=0.9996），线性范围 0.01μg～2.01μg，平均 加样回收率为 100.01%，RSD=1.35%（n=6）。（2）总黄酮含量的方法：以球松素为对照 品，测定波长为 286nm，回归方程为 Y=0.081x+0.008（R=0.9994），在 2.22 μg/mL～ 17.80μg/mL 范围内，线性关系良好，平均加样回收率为 0.9973，RSD=2.64%（n=6）。 （3）最优的提取工艺条件： 12 倍量 70％乙醇，浸泡 30 分钟，超声提取 1 小时，重 复提取 3 次。结果分别按各指标与原药材比率计，总黄酮提取率 4.23%，球松素提取率 0.59%。纯化工艺条件为：DM130 型树脂，按径高比 1:8 装柱, 上样浓度 0.05（g /ml） [以生药材计]，上样 4BV（倍树脂量），流速 3BV/h，上样完成后静置 2h，以 4BV 的纯 水进行除杂后，4BV 的 70%乙醇以 3BV/h 的速率进行洗脱，树脂上样 3 次后需再生。按 照确定的工艺条件进行验证，结果使最终的纯化物中总黄酮含量达到 50.0%以上，球 松素含量达到 9.0%以上。（4）建立的 HPLC 指纹图谱标示了 12 个共有峰，10 批样品 相识度在 0.96 以上，通过已知化合物进行指认，确定了其中 7 个成分。在指纹图谱建 立的色谱条件下，同时建立了一测多评法，可以在仅有球松素对照品的情况下，运用 校正因子同时测定四个主要有效成分的含量。HPLC 指纹图谱和一测多评法的建立，可 以在一次 HPLC 检测中，同时运用指纹图谱和四个成分含量来进行质量控制。 结论： 本研究确定的工艺条件和质量控制方法可以为山橿的进一步药效学研究和 综合开发利用奠定基础。 关键词：山橿；有效部位；纯化工艺；质量控制；指纹图谱；一测多评法 Abstract Objective: To establish the enrichment and purification and quality control methods with the effective part of Lindera reflexa HemsL. Me