基因工程抗体与导向药物.ppt

第十二章?????? 基因工程抗体与导向药物 一、抗体的基因结构和重排 二、基因工程抗体的构建和类型 三、基因工程抗体的表达 四、导向药物 五、基因工程抗体的导向生物治疗 一、抗体的基因结构和重排 （一）重链V区基因人类VH（119）-D（30）-J（9） （二）轻链基因的结构和重排 如图19-2 κ链：Vκ（100）、Jκ（5）、Cκ（1） λ链： Vλ （100）Jλ（6） Cλ（6） （三）重链C区基因 如图19-3 Cμ-Cδ-Cγ3-Cγ1-Cε2-Cα1-Cγ2-Cγ4-Cε-Cα2 （四）人源性单抗的抗体组合文库技术（原理） 1．mRNA的提取 2．RT-PCR制备cDNA 3．抗体组合文库技术 4．噬菌体表面呈现技术（phage display technology） 5．阳性克隆的筛选 二、基因工程抗体的构建和类型 (一)嵌合抗体(Chimeric Antibody) (二)人源化抗体(Humaniged antibody) (三)小分子抗体 （四）人源性单抗的抗体组合文库技术 （一）嵌合抗体 鼠Ig的V区与人Ig的恒定区（C区）基因重组后，在原核细胞或真核细胞中表达，这种嵌合抗体含75～80%人抗体，20%鼠抗体,注入人体后可减少人抗鼠抗体的反应。其优点是减少了鼠单抗的免疫原性，另外人抗体C区仍可有效地发挥补体激活和与FC受体结合的生物学活性，在构建时可以有目的地选择抗体类型，可有效地发挥抗体的生物效应，已有多种针对不同抗原的嵌合抗体的报道、但多为IgG1亚类。 （二）人源化抗体 为了减少嵌合抗体中鼠源性序列，人们又将鼠抗体V区（H、L链）中的3个超变区基因插入人抗体的V区的框架（FR）基因中，这样构建的抗体保留了鼠抗体与抗原结合的特异性。这种抗体几乎百分之百人源化了。目前针对不同抗原如肿瘤相应抗原、细胞表面受体、细胞因子等，已构建了许多种人源化基因工程抗体。 (三)小分子抗体 （1）单链抗体(Single Chain Fv ScFv) （2）重组Fab片断 （3）单域结构VH或VL （4）双特异性抗体 （5）免疫粘连素 （6）催化抗体 单链抗体 单链抗体(Single Chain Fv ScFv);它是由抗体重，轻链的可变区基因(VH、VL)之间通过一段编码连接肽基因，拼接后表达形成的重组蛋白。是一种具有抗原结合能力的最小抗体片段，可在一些不需Fc段效应功能的实际应用中开展研究和应用。其优点是分子量小，易于穿透组织到达靶器官发挥功效，易于构建和生产，但易于被清除。 重组Fab片断 重组Fab片断是单价的VH-CH（Fd）和轻链的VL-CL两个片断由二硫键连接而成。它具有与抗体相同的抗原结合活性，其特点是结构稳定，制作简便。细菌表达的Fab与酶解Ig后所获得的Fab具有相同的功能。 单域结构VH或VL 分别由单域VH或VL采用基因工程法构建的抗体组成，该类抗体构建简便，鉴于在抗原结合部位中，VH作用比VL大，大多数单独的VH保留了较好的抗原结合能力和专一性，单独VL抗体因只有一个功能区而没有抗原结合能力，无应用价值，因此单域VH抗体在制备和应上有其优点，然而由于暴露了原先与VL结合的疏水性，使其特异性降低，还需对VH片断做一些结构改造才能应用。 双特异性抗体 双特异性抗体：将两个抗体的重链和轻链V区基因的重组体导入宿主细胞中表达，或用肽链连接物连接两种不同特异性抗体的可变区基因，构建单肽双特异性抗体。如：将抗肿瘤细胞EGFR的Fab与抗T细胞CD3的Fab组成双特异性抗体，有助于介导T细胞杀肿瘤（连接效-靶细胞）（如图19-4）。抗纤维蛋白的ScFv-tPA基因连接，有助于与血栓中的纤维蛋白结合，使tPA定位溶解血栓，此外还可作为载体将毒素、核酸、药物、定位于靶细胞，发挥治疗肿瘤和心血管疾病。 免疫粘连素 抗体恒定区（C区）N-端基因连接人细胞受体（CD4-FC）或粘附分子基因在真核细胞中表达正确折叠的抗体样融合蛋白（称免疫粘连素），，N端为同一种分子称为同源二聚体结构。N端为两种不同的分子称异源二聚体结构。一方面可发挥抗体效应，另一方面N端CD4为T细胞亚类糖蛋白，又是HIV受体，CD4可与HIV结合由FC活性杀灭HIV，可阻断HIV感染T细胞。 催化抗体 基因工程催化抗体是通过在轻链V区插入能与金属离子结合的氨基酸序列，再与重链V区重组，使重链V区识别抗原，并选择性地结合底物，轻链则可通过促进底物反应过渡态的形成而发挥催化作用。 三、基因工程抗体的表达 (一)在哺乳动物细胞（CHO）中的表达 (二)在微生物(原核)细胞中的表达 (三)在植物中表达 （四）在酵母中表达 四、导向药物 导向药物是由单抗与放射性核素(诊断用)、毒素或化学药物的偶合