三血清总胆固醇浓度的测定.pdfVIP

Gannan Medical University 实验三 血清总胆固醇浓度的测定 赣南医学院 生物化学与分子生物学教研室 Gannan Medical University 【目的】 1.掌握721分光光度计的使用； 2.熟悉比色分析法的基本原理。 Gannan Medical University 【原理】 血清中总胆固醇(TC)包括游离胆固醇(FC)和胆 固醇酯(CE)两部分。胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解 为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，游离胆固醇在胆 固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和H O ， 2 2 H O 在4-氨基安替比林和酚存在时，由过氧化物酶 2 2 催化，反应生成红色醌类化合物，其颜色深浅与标 本中TC含量成正比，最大光吸收在505nm 。 Gannan Medical University Gannan Medical University 分光光度计工作原理：物质对不同波长光的吸收具有 选择性，不同的物质都有各自的吸收光带。当光色散后的 光谱通过某一溶液时，其中某些波长的光线就会被溶液吸 收。在一定的波长下，溶液中物质的浓度与光能量减弱的 程度有一定的比例关系，即符合朗伯- 比耳定律 (Lambert- Beer law) 。 Gannan Medical University T I/Io A lg(Io/I) abc 式中，T为透过率，Io为入射光强度，I为透射光强度， A为消光值(吸光度)，a为吸收系数，b为溶液的光径长度， c为溶液的浓度。从以上公式可以看出，当入射光、吸收 系数和溶液厚度一定时，透光率是根据溶液的浓度而变化 的。 Gannan Medical University [步骤] 1、取干燥试管3支，编号，按下表操作： 空白管 标准管 测定管 血清 － － 20µl 标准液 － 20µl － 蒸馏水 20µl － － R试剂 2ml 2ml 2ml 混匀后，37℃水浴5 min，立即用分光光度计比色，于 505 nm波长处以空白管调零，读出各管吸光度 Gannan Medical University 测定管吸光度 血清总胆固醇＝ ×胆固醇标准液浓度 标准管吸光度 （200 mg/dl） 【参考范围】 正常人血清总胆固醇：3.1-5.95 mmol/L(120-230 mg/dl) Gannan Medical University 721分光光度计的使用 1. 打开电源开关，预热仪器20 min 。 2. 选定所需波长，灵敏度档调至1档。 3. 打开暗盒盖，调0(用0透光率旋钮将指针调节到透 光率0处) 。 4. 关上暗盒盖，调100%(用100%透光率旋钮将指针 调节到透光率100%处) 。重复3-4步骤数次，直至 指针稳定。 Gannan Medical University 5. 将装有空白液、标准液、待测液的比色皿依次放入 比色架中，盖上暗盒盖，此时光路开启，使空白液 位于光路部分，用100%透光率调节旋钮使电表指针 指在透光率100%位置(即A