蓝芪复方中多糖的纯化及分子量测定-中药学专业论文.docxVIP

广东药学院硕士研究生学位论文 广东药学院硕士研究生学位论文 目录 摘 要I Abstract IV 引言 1 1 研究意义 1 2 中药多糖免疫增强作用的研究进展 4 3 中药多糖在猪繁殖与呼吸障碍综合症中的研究进展 6 4 多糖在提取、纯化、分子量测定方法的研究进展 7 第一章 板蓝根、黄芪、淫羊藿粗多糖的提取10 1 仪器与试药 10 1.1 试剂与试药 10 1.2 仪器 11 2 方法与结果 11 2.1 多糖含量测定方法的建立 11 2.2 蛋白含量测定方法的建立 15 2.3 色素测定方法的建立 17 2.4 板蓝根多糖的提取 17 2.4.1 板蓝根药材的脱脂处理 17 2.4.2 板蓝根多糖醇沉浓度的筛选 17 2.4.3 板蓝根多糖提取工艺的优化 19 2.4.4 验证试验 21 2.5 黄芪多糖的提取 21 2.5.1 黄芪多糖的脱脂处理 21 2.5.2 黄芪多糖提取工艺优化 21 2.5.3 黄芪多糖最佳提取工艺验证试验 23 2.6 淫羊藿多糖的提取 23 2.6.1 淫羊藿多糖的脱脂处理 23 2.6.2 淫羊藿多糖提取工艺优化 23 2.6.3 淫羊藿多糖最佳提取工艺验证试验 25 3 讨论与结论 25 3.1 讨论 25 3.2 结论 26 第二章 板蓝根、黄芪、淫羊藿多糖的分离及纯化27 1 仪器与试药 27 1.1 试剂与试药 27 1.2 仪器 28 2 方法与结果 28 2.1 板蓝根多糖的分离纯化 28 2.1.1 板蓝根多糖脱蛋白方法筛选 28 2.1.2 板蓝根多糖脱色工艺的研究 31 2.1.3 板蓝根多糖纯化工艺研究 36 2.1.4 凝胶柱层析纯化板蓝根多糖 37 2.2 黄芪多糖的分离纯化 44 2.2.1 黄芪多糖的脱蛋白处理 44 2.2.2 黄芪多糖脱色研究 45 2.2.3 透析法除去小分子化合物 47 2.2.4 凝胶柱层析纯化黄芪多糖 49 2.3 淫羊藿多糖的分离纯化 53 2.3.1 淫羊藿多糖的脱蛋白处理 53 2.3.2 淫羊藿多糖脱色研究 53 2.3.3 透析法除去小分子化合物 56 2.3.4 凝胶柱层析纯化淫羊藿多糖 57 3 讨论与结论 62 3.1 讨论 62 3.2 结论 63 第三章 板蓝根、黄芪、淫羊藿多糖分子量测定64 1 仪器与试药 64 1.1 试药 64 1.2 高效液相色谱系统 64 2 方法与结果 64 2.1 多糖分子量测定方法的建立 64 2.1.1 溶液的制备 64 2.1.2 色谱条件的设定 65 2.1.3 多糖分子量标准曲线的制备 65 2.1.4 仪器精密度试验 68 2.1.5 样品稳定性实验 68 2.1.6 多糖样品分子量的测定 68 3 讨论与结论 76 第四章 总结 78 1 结论 78 2 创新点 79 3 展望 79 参考文献 80 攻读学位期间发表的论文 83 致谢 84 蓝芪复方中多糖的纯化及分子量测定 摘 要 目的：对蓝芪复方中板蓝根、黄芪、淫羊藿多糖进行分离纯化并测定其分子量， 为后续蓝芪复方多糖注射剂的制备及免疫活性研究提供实验及物质基础。 方法与结果：在单因素研究的基础上以多糖得率为指标采用正交设计试验， 优化了板蓝根、黄芪、淫羊藿三味药材中多糖提取的最佳工艺。板蓝根：称取适 量脱脂板蓝根药材，15 倍量蒸馏水浸泡 30min、90℃温浸提取 2 次，每次 3 h， 合并提取液，浓缩至 1 倍药材量，5000rpm 离心 10 min，上清液加入乙醇，使醇 沉浓度 75%，静置 12h，滤过得到醇沉物，加入 20 倍量蒸馏水复溶醇沉物，得 板蓝根多糖液，板蓝根多糖的提取率为 2.34%。筛选最佳脱蛋白方法，采用 Sevag 法除去板蓝根多糖液中的蛋白；在单因素研究基础上以脱色率为指标采用正交设 计试验筛选 D152 型大孔吸附树脂静态吸附最佳脱色工艺为：D152 型大孔弱酸 阳离子交换树脂，吸附时间 180min、上样量为 1 倍柱体积，洗脱流速控制在 2mL/min，过滤，收集滤液，测定多糖保留率、蛋白质脱除率和脱色率分别为 93.91%、77.19%、61.51%；采用截留分子量为 3000 的透析袋，透析 48h 进一步 除去板蓝根多糖液中的小分子色素及无机盐；脱色脱蛋白去离子处理的板蓝根多 糖液上 DEAE-Sephadex A-50 凝胶层析柱，分别以不同浓度的盐进行洗脱后得到 板蓝根多糖洗脱流份 A、B、C、D、E 五个组分，分别上凝胶柱 Sephadex G100 进一步分离纯化；通过紫外法测定各组分多糖液在 260nm 及 280nm 处无吸收峰， 说明不含蛋白和核酸；采用高效液相色谱法测定五组分板蓝根多糖洗脱流份的分 子量，色谱条件为 Shodex OHpa