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- 2019-06-07 发布于上海
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宁夏医科大学学位论文独创性声明
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宁夏医科大
宁夏医科大学硕士研究生学位论文
中文摘要
硫酸铍诱发人胚肺细胞凋亡机制及枸杞多糖保护
作用的初步研究
摘 要
目的:用体外实验的研究方法,观察硫酸铍(BeSO4)致人胚肺成纤维细胞(MRC-5) 活性氧(ROS)的变化、相关凋亡基因 c-fos、bcl-2、bax、Caspase-3 的表达水平及细胞内 钙离子浓度及三磷酸肌醇受体(IP3R)表达的改变,探讨硫酸铍是否通过影响活性氧和钙 离子导致人胚肺细胞损伤,同时观察枸杞多糖(LBP)是否对硫酸铍致人胚肺细胞损伤具 有保护作用。
方法:体外培养人胚肺成纤维细胞,共分为空白对照组、硫酸铍低中高剂量组、枸杞 多糖保护组及枸杞多糖对照组等 6 组。硫酸铍给予剂量分别为 0、1、10、100μmol/L,枸 杞多糖剂量为 10μmol/L。细胞生长至对数生长期,根据实验需求,达到细胞密度后,加入 药物培养 24h 收集细胞,分别进行以下实验:1.流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS);2. 免 疫组化(SP)法检测 c-fos、bcl-2、bax、Caspase-3 相关的表达 3.激光共聚焦法检测细胞内 [Ca2+]的水平;4.RT-PCR 测定三磷酸肌醇受体(IP3R)的表达。
结果:
1.BeSO4 中、高剂量组 ROS 含量与空白对照组相比明显增高,表达细胞数增多,具有 统计学意义(P0.05)。
2. 细胞加药培养 24h 后,免疫组化结果显示: BeSO4 低、中、高剂量组 c-fos、bcl-2 表达均高于空白对照组,差异有统计学意义(P0.05),且随着药物剂量增加表达水平不断 增高。BeSO4 中、高剂量组 bax 表达均低于空白对照组、BeSO4 低、中、高剂量组 Caspase-3 表达均低于空白对照组,差异有统计学意义(P0.05)且随着药物剂量增加表达水平不断 降低。
3. 硫酸铍高剂量组 细 胞 内 Ca2+ 浓 度 明 显 高 于 空 白 对 照 组 , 差异 有 统 计 学 意 义
(P0.05)。
4. 激光共聚焦显微镜下,100μmol/L BeSO4 组中,细胞核呈现出明亮的绿色荧光,细
胞分界清楚呈梭型,BeSO4+LBP 组细胞呈圆形,胞体淡绿色,细胞周围可见绿色荧光小点。
5. BeSO4 低、中、高剂量组Ⅲ型 IP3R 表达与空白对照组比较差异均有统计学意义
(P0.01);
6. LBP 对 BeSO4 损伤细胞的保护作用:BeSO4 组 ROS 含量高于空白对照组(P0.01)、 LBP 组 ROS 含量低于空白对照组(P0.01),二者具有交互作用(P0.05)。对于 bcl-2、 Caspase-3 的表达 BeSO4 和 LBP 具有交互效应(P0.05 或 P0.01)。Ca2+和 IP3R 检测结 果显示 BeSO4 和 LBP 具有交互作用(P0.05 或 P0.01)。
结论:
1. BeSO4 可致 MRC-5 细胞内 ROS 含量升高,LBP 对此有一定保护作用。
2. BeSO4 可致 MRC-5 细胞内的 c-fos、bcl-2 基因表达量升高;bax、Caspase-3 基因表达 量减少,LBP 对此有一定的调节作用。
3. BeSO4 可致 MRC-5 细胞内钙离子浓度升高,LBP 对其有一定保护作用。
4. BeSO4 可能通过 IP3R 受体通道,造成 MRC-5 细胞钙超载,LBP 对 IP3R 受体的表达 有一定的调节作用。
关键词:硫酸铍,枸杞多糖,活性氧,钙离子,凋亡基因
宁夏医科大
宁夏医科大学硕士研究生学位论文
英文摘要
Beryllium sulfate induce human embryos lung a
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