硫酸铍诱发人胚肺细胞凋亡机制及枸杞多糖保护作用的初步研究-劳动卫生与环境卫生学专业论文.docxVIP

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  • 2019-06-07 发布于上海
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硫酸铍诱发人胚肺细胞凋亡机制及枸杞多糖保护作用的初步研究-劳动卫生与环境卫生学专业论文.docx

宁夏医科大学学位论文独创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是个人在导师的指导下,独立 进行研究工作所取得的成果,无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以 注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过 的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以 明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名_____ 论文导师签名_____ 年 月 日 年 月 日 宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明 宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文,同意学校按规定向国家 有关部门机构送交论文的复印件和电子版,允许被查阅和借阅。本人授 权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索,可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。 可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名_____ 论文导师签名_____ 年 月 日 年 月 日 宁夏医科大 宁夏医科大学硕士研究生学位论文 中文摘要 硫酸铍诱发人胚肺细胞凋亡机制及枸杞多糖保护 作用的初步研究 摘 要 目的:用体外实验的研究方法,观察硫酸铍(BeSO4)致人胚肺成纤维细胞(MRC-5) 活性氧(ROS)的变化、相关凋亡基因 c-fos、bcl-2、bax、Caspase-3 的表达水平及细胞内 钙离子浓度及三磷酸肌醇受体(IP3R)表达的改变,探讨硫酸铍是否通过影响活性氧和钙 离子导致人胚肺细胞损伤,同时观察枸杞多糖(LBP)是否对硫酸铍致人胚肺细胞损伤具 有保护作用。 方法:体外培养人胚肺成纤维细胞,共分为空白对照组、硫酸铍低中高剂量组、枸杞 多糖保护组及枸杞多糖对照组等 6 组。硫酸铍给予剂量分别为 0、1、10、100μmol/L,枸 杞多糖剂量为 10μmol/L。细胞生长至对数生长期,根据实验需求,达到细胞密度后,加入 药物培养 24h 收集细胞,分别进行以下实验:1.流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS);2. 免 疫组化(SP)法检测 c-fos、bcl-2、bax、Caspase-3 相关的表达 3.激光共聚焦法检测细胞内 [Ca2+]的水平;4.RT-PCR 测定三磷酸肌醇受体(IP3R)的表达。 结果: 1.BeSO4 中、高剂量组 ROS 含量与空白对照组相比明显增高,表达细胞数增多,具有 统计学意义(P0.05)。 2. 细胞加药培养 24h 后,免疫组化结果显示: BeSO4 低、中、高剂量组 c-fos、bcl-2 表达均高于空白对照组,差异有统计学意义(P0.05),且随着药物剂量增加表达水平不断 增高。BeSO4 中、高剂量组 bax 表达均低于空白对照组、BeSO4 低、中、高剂量组 Caspase-3 表达均低于空白对照组,差异有统计学意义(P0.05)且随着药物剂量增加表达水平不断 降低。 3. 硫酸铍高剂量组 细 胞 内 Ca2+ 浓 度 明 显 高 于 空 白 对 照 组 , 差异 有 统 计 学 意 义 (P0.05)。 4. 激光共聚焦显微镜下,100μmol/L BeSO4 组中,细胞核呈现出明亮的绿色荧光,细 胞分界清楚呈梭型,BeSO4+LBP 组细胞呈圆形,胞体淡绿色,细胞周围可见绿色荧光小点。 5. BeSO4 低、中、高剂量组Ⅲ型 IP3R 表达与空白对照组比较差异均有统计学意义 (P0.01); 6. LBP 对 BeSO4 损伤细胞的保护作用:BeSO4 组 ROS 含量高于空白对照组(P0.01)、 LBP 组 ROS 含量低于空白对照组(P0.01),二者具有交互作用(P0.05)。对于 bcl-2、 Caspase-3 的表达 BeSO4 和 LBP 具有交互效应(P0.05 或 P0.01)。Ca2+和 IP3R 检测结 果显示 BeSO4 和 LBP 具有交互作用(P0.05 或 P0.01)。 结论: 1. BeSO4 可致 MRC-5 细胞内 ROS 含量升高,LBP 对此有一定保护作用。 2. BeSO4 可致 MRC-5 细胞内的 c-fos、bcl-2 基因表达量升高;bax、Caspase-3 基因表达 量减少,LBP 对此有一定的调节作用。 3. BeSO4 可致 MRC-5 细胞内钙离子浓度升高,LBP 对其有一定保护作用。 4. BeSO4 可能通过 IP3R 受体通道,造成 MRC-5 细胞钙超载,LBP 对 IP3R 受体的表达 有一定的调节作用。 关键词:硫酸铍,枸杞多糖,活性氧,钙离子,凋亡基因 宁夏医科大 宁夏医科大学硕士研究生学位论文 英文摘要 Beryllium sulfate induce human embryos lung a

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