篮子鱼养殖环境微生物多样性及其肠道内与浒苔多糖降解相关菌株的研究-生物化学与分子生物学专业论文.docx

汕头大学硕士学位论文 汕头大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 摘要 浒苔的爆发对海水养殖、海洋生态环境及沿海旅游业的发展都非常不利。目 前对浒苔的综合利用的研究还比较少。研究报道浒苔多糖具有硫酸多糖的生理活 性，但多糖一般要在一定的分子量范围内才具有多糖的生理活性。目前关于微生 物降解浒苔多糖的研究还非常少，本论文以喜好浒苔为食料的篮子鱼为研究对 象，通过从其肠道内获得高效利用浒苔多糖的降解菌株和菌群进行浒苔多糖生物 降解的研究，并对篮子鱼的养殖区进行环境微生物多样性的分析，以期为浒苔多 糖的高效利用及浒苔作为饲料来进行篮子鱼的高效养殖奠定基础，本论文的主要 研究结果如下： 利用 PCR-DGGE 结合 16S rDNA 文库的方法分析黄斑篮子鱼养殖环境中水 体、表层沉积物、浒苔表面及篮子鱼肠道微生物多样性。研究结果表明：篮子鱼 养殖环境水体细菌分属于 Actinobacteria、Bacteroidetes、Verrucomicrobia、 α、β、 γ- Proteobacteria、Unidentified bacteria。篮子鱼养殖环境表层沉积物细菌分属于α、 γ、δ- Proteobacteria、Firmicutes、Bacteroidetes、Chlorobi、Unidentified bacteria。 篮子鱼肠道细菌分属于α、β、γ、δ、ε- Proteobacteria、Actinobacteria、Firmicutes、 Bacteroidetes、 Spirochaetes。 浒 苔 表 面 细 菌 分 属 于 α 、 γ-Proteobacteria、 Actinobacteria、Firmicutes、Planctomycetes、 Fusobacteria、 Verrucomicrobia、 Unidentified bacteria。研究结果发现篮子鱼养殖池中水体、表层沉积物、浒苔表 面和篮子鱼肠道微生物的组成存在着明显的差异，多样性较丰富。 采用热水法进行浒苔多糖的提取，对经过 DEAE-Sephraose Flast Flow 分离纯 化的浒苔多糖进行结构分析。结果表明浒苔多糖 EP2 中多糖的含量为 58%，蛋 白质含量为 1.06%，硫酸根含量为 22%。红外光谱分析表明浒苔多糖是具有硫酸 基的酸性多糖，利用 GC-MS 分析浒苔多糖组分表明其包含阿拉伯糖、鼠李糖、 来苏糖、吡喃甘露糖、木糖和葡萄糖。 以制备的浒苔多糖作为唯一碳源，从篮子鱼肠道内筛选得到一株能够降解浒 苔多糖的菌株 Vibriosp.B30，其最适的产浒苔多糖降解酶的条件为培养时间 24h、 发酵温度 30℃、起始 pH 为 7、最适氮源为硫酸铵。该酶的最适催化温度为 50 II ℃、pH 为 7，10mmol/L 的钙离子、钠离子能够较明显提高该酶酶酶活力。0.5g/L 和 1g/L 的 NP40、聚氯乙烯月桂醚、Tween80、Tween20、TritionX-100 表面活性 剂对浒苔多糖降解酶活力具有一定的提高作用。 以浒苔多糖作为唯一碳源，从篮子鱼肠道内筛选得到一组稳定且高效的浒苔 多糖降解菌群，该菌群的最大产酶能力为 470U/mL，其能消化利用 75%以上的 浒苔多糖的糖苷键。利用 PCR-DGGE 结合克隆文库的方法研究该混合菌群的结 构发现优势菌属为弧菌属和假交替单胞菌属，初步表明这两个菌属的菌株在浒苔 多糖的降解过程中起着重要的作用。 关键词：篮子鱼、浒苔多糖、PCR-DGGE、混合菌群 III Abstract The outbreak of Enteromorpha seriously imperiled the development of mariculture, marine ecological environment and coastal tourism. How to take advantage of Enteromorpha efficiently has become an important topic of improvement the ecological environment and comprehensive utilization of algae. Studies indicate that Enteromorpha polysaccharides have a variety of biological activies, such as ant