SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量解析.pptVIP

蛋白质相对分子质量的测定SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 【实验目的】 理解电泳法测定蛋白质分子量的原理。 掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法的基本操作 学会绘制标准曲线。 【实验原理】 聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺（Acr）和N，N-甲叉双丙烯酰胺（Bis）聚合而成，是一种具有交叉网状结构的凝胶，可以产生分子筛效应，其孔径大小可以通过配置药品的浓度来控制，常用作电泳的载体。 本实验利用了聚丙烯酰胺凝胶的电泳和分子筛 双重作用。 十二烷基硫酸钠（SDS）是一种阴离子表面活性剂，它的疏水端可以与蛋白质分子结合。绝大多数蛋白质与SDS结合的质量比为1.4:1，使蛋白质带上密度相同的负电荷，其电荷强度远远强于蛋白质原有的电荷，这就掩盖因为蛋白质种类不同而造成的电荷差异，使电泳的迁移率仅与蛋白质的分子量有关。 【实验器材】 DYCZ-24D型垂直板电泳仪 移液管若干 100mL烧杯 微量进样器 细长头吸管 【试剂配制】 1.分离胶和浓缩胶 【试剂配制】 2.电泳缓冲液（Tris-甘氨酸缓冲液，pH=8.3）：取Tris6.0g，甘氨酸28.8g，SDS1.0g，用去离子水溶解后定容至1L。 3.样品溶解液（用于溶解标准蛋白质及样品蛋白质）：取SDS0.1g，巯基乙醇0.1mL，甘油1.0mL，溴酚蓝28.8g，0.2mo