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△△Ct的必要条件 两个基因（目的基因和内参基因）必须有相一致的扩增效率，并尽可能接近100%！ 如何判断扩增效率一致 同时扩增目的基因和内参基因，通过查看扩增曲线中指数增长期是否平行来确定扩增效率是否相似 THANK YOU! 从RNA提取到荧光定量PCR 内容摘要 一、荧光定量PCR的原理 二、荧光定量PCR的应用 三、荧光定量PCR的操作 四、荧光定量PCR结果分析 一、荧光定量PCR的原理 定时定量PCR技术----定义 利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct或标准曲线的关系对起始模板进行定量分析 名词概念： 扩增曲线 荧光阈值 Ct值 扩增曲线 曲线拐点清楚，特别是低浓度样本指数期明显， 曲线指数期斜率与扩增效率成正比，斜率越大扩增效率越高。 标准的基线平直或略微下降，无明显的上扬趋势。 扩增曲线平行性好，表明各反应管的扩增效率相近。 荧光阈值 一般将 PCR反应前 15个循环的荧光信号作为荧光本底信号， 荧光域值是PCR3—15个循环荧光信号标准差的10倍， 荧光域值设定在 PCR扩增的指数期. Ct值 PCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数 实时定量PCR的几种方法比较 二、荧光定