20XX年聚合酶链反应及基因突变检测方法.pptVIP

聚合酶链反应及基因突变检测方法;;PCR反应的特点;一、PCR反应原理和反应过程;PCR原理;延伸;;94 ?C (30 s);94 ?C (30 s);;;二、PCR的反应体系和反应条件;1 模板;2、引 物（Primers) ;设计引物的原则：;3、脱氧核苷三磷酸（dNTP） ;4、DNA聚合酶;;;5、镁离子浓度;6、其它反应因素 ;（二）PCR的反应条件 ;1、温度 ;2、时间 ;3、循环次数 ;指数增长期 线形增长期 平台期;;三、PCR技术的质量控制;;;第二节 以PCR为基础的相关技术;以PCR为基础的相关技术;一、逆转录PCR（RT-PCR）;;;二、定量PCR;;;;;;;TaqManTM;5’;实时定量RT-PCR检测CEA基因拷贝数在监测胃肠癌微转移中的应用; CEA 基因在消化系统上皮腺癌， 尤其是直结肠癌和胃癌中高表达， 因此在肿瘤细胞内可检测到其转 录本，而在正常成人体内极少表 达。 ;正常成人体内CEA基因表达;; 在肿瘤发生血道转移时，外周血 中有少量肿瘤细胞残留。用灵敏、 特异的技术检测到这些肿瘤细胞 中CEA基因的转录本，是发现肿 瘤早期转移的关键。;胃肠癌患者外周血中CEA基因的表达;三、多重PCR;四、差异显示PCR（differential display