SDS PAGE,聚丙烯酰胺凝胶电泳详解.pptxVIP

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis，SDS一、什么是SDS？十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS)是一种阴离子去污剂。它在水溶液中以单体（monomer）和分子团（micellae）的混合形式存在。SDS的作用 破坏蛋白质分子之间以及其他物质分子之间的非共价键，使蛋白质变性而改变原有的构象，保证蛋白质分子与SDS充分结合而形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物。二、SDS的基本原理（一）蛋白质分子的解聚 样品介质和聚丙烯酰胺中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，而电荷因素可以被忽略。1、SDS 阴离子去污剂 变性剂 助溶性试剂 断裂分子内和分子间的氢键 分子去折叠 破坏蛋白质分子的二级和三级结构2、强还原剂 巯基乙醇（β-mercaptoethanal） 二硫苏糖醇（dithiothreitol，DTT） 使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂。SDS和还原剂的作用：（1）分子被解聚或组成它们的多肽键（2）氨基酸侧链与SDS充分结合形成带负 电荷的蛋白质-SDS胶束。（3）蛋白质-SDS胶束所带的负电荷大大超 过了蛋白质分子原有的电荷量，消除 了不同分子之间原有的电荷差异。蛋白质-SDS胶束的特点（1）形状像一个长椭圆棒（2）短轴对不同的蛋白质亚基