钌Ⅱ多吡啶配合物联合X射线照射对骨肉瘤细胞凋亡诱导作用的实验研究-脊柱外科专业论文.docxVIP

广州医学院 硕士研究生学位论文 钌（Ⅱ）多吡啶配合物联合X射线照射对骨肉瘤细胞 凋亡诱导作用的实验研究 The research for Ruthenium (Ⅱ) pyridine complexes joint X-Rays to osteosarcoma cell apoptosis entrainment of experiments 专 业 名 称： 脊柱外科 学位申请人： 赵建华 导 师： 郭奇峰 教授 广州医学院2广州 2012年5月 PAGE PAGE 1 广州医学院硕士学位论文目 录 广州医学院硕士学位论文 英文缩写词表 2 中文摘要 3 ABSTRACT 7 前 言 12 第一部分 钌（Ⅱ）多吡啶配合物对骨肉瘤 MG-63细胞的凋亡诱导作用 13 1、材料与方法 13 2. 实验方法 14 3、结 果 19 4、讨论 24 第二部分：不同剂量的X射线照射对骨肉瘤MG-63细胞凋亡诱导影响的实验研究 26 1、材料与方法 26 2、实验方法 27 3、结 果 29 4、讨论 32 第三部分：钌（Ⅱ）多吡啶配合物联合X射射线对骨肉瘤MG-63细胞凋亡诱导作用的实验研 究 34 1、材料与方法 34 2. 实验方法 36 3、结 果 39 4、讨论 43 小 结 45 附 图 46 参考文献 54 综 述 56 致 谢 66 原创学位声明 66 广州医学院硕士学位论文 广州医学院硕士学位论文 英文缩写词表 LD50 Lethal Dose 50 半数致死量 CCK-8 Cell Counting Kit-8 细胞计数试剂盒 OD optical delnsity 光密度 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 FBS fetal bull serum 胎牛血清 ml milliliter 毫升 PBS posphate buffered saline 磷酸盐缓冲盐液 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 Min minute 分钟 EDTA 乙二胺四乙酸 Bcl-2 B cell lymphoma/leukemia-2 B细胞淋巴瘤/白血病的-2 mg milligram 毫克 h Hour 小时 D day 天 DEAE 2-diethylaminoethanol 2-二乙氨基乙醇 rpm revolution perminute 每分钟转数 DID Double Immunodiffusion 双向免疫扩散 IEP immunoelectrophoresis 免疫电泳 Cr h V Creatinine Hour volt 肌肝 小时 伏特 Western Blot 免疫印迹 SDS 十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 钌（Ⅱ）多吡啶配合物联合X射线对骨肉瘤 细胞凋亡诱导作用的实验研究 硕士研究生：赵建华 导 师 ：郭奇峰 教授 中文摘要 ：骨肉瘤是一种起源于骨间叶细胞的原发性恶性骨肿瘤，约3/4的患者发病年龄 在10～30岁，是青少年最常见的骨骼恶性肿瘤，有起病急、肺转移早、死亡率高的特点[1]。 骨肉瘤临床治疗效果差，特别是转移或复发的病人，近50年来治疗并未取得的很大的进展， 长期生存率不到25％[2]。因此，寻求骨肉瘤治疗的新方法已成为临床迫切所需。 化疗是常见的骨肉瘤治疗方法。二十世纪七十年代，顺铂作为抗肿瘤药物在临床上的广 泛使用，使金属配合物的抗肿瘤活性成为生物医药领域的研究热点之一。铂类抗肿瘤药也成 为骨肉瘤化疗的四大经典药物之一[3]。然而铂类药物存在严重的不良反应（神经毒性，肾毒 性等）和耐药性（天然性或诱导性）[4]。为了弥补这些不足，人们一直在其他金属化合物中 寻找铂类的替代品。钌配合物以其抗癌细胞毒性、类似铂类化合物的配体交换能力、与顺铂 无交叉耐药性以及通过铁转运机制对人体毒性低等特性引起了广泛的关注，目前普遍认为钌 配合物将成为最有前途的抗癌药物之一[5-7]。欧盟自1997年成立了钌抗癌药物的研究和发展 工作组，进一步加强钌抗癌药物的研究，某些钌金属配合物已经进入了一期临床[8, 9]。但是 钌配合物也存在对不同肿瘤细胞抑制效果不一以及缺乏靶向性等缺陷。近年来，有报道称新 合成的[Ru(dmb)2(DBHIP)](ClO4)2能够诱导多种肿瘤细胞的凋亡，如BEL-7402，C-6，HepG-2 和MCF-7[10]。 辐射诱导细胞凋亡是目前肿瘤放射生物学研究的热点[11，12]。凋亡是细胞受照射后一些细 胞死亡的重要方式，凋亡小体是目前判断细胞凋亡的重要形态指标[11]。辐射