PCR技术侯云鹏-公开课件.pptVIP

PCR技术;1.PCR概述2.PCR反应的原理和步骤3.PCR的反应动力学4.PCR反应体系的主要成分和作用5.PCR的反应条件控制6.PCR反应的特点7.防止PCR错误扩增的措施8.PCR常见问题及解决办法9.常规PCR技术及几类PCR新技术;一、聚合酶链式反应（PCR）概述;（二）发展历程 1971年 Kjell Kleppe提出PCR原始雏形 概念 1983年 Kary Mullis发明PCR技术 1987年 获得专利 1993年 诺贝尔化学奖;; PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：; 1、模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备； 2、模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；;3、引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。 重复循环变性