免疫血清制备课件.ppt

福氏佐剂 福氏佐剂是试验动物最常用的佐剂,可分为完全福氏佐剂和不完全福氏佐剂. 不完全福氏佐剂:羊毛脂/液体石蜡油=1:2-----1:5 完全福氏佐剂是在不完全福氏佐剂的基础上添加分枝杆菌,主要是灭活的卡介苗. 小鼠的抓取 拇指和食指轻夹小鼠的尾巴后提起,使前肢抓紧铁盒.如果小鼠比较顽皮,可以抓着尾巴绕两圈. 另一只手的拇指和食指抓住小鼠背部的皮肤,使小鼠仰卧于无名指和中指之间. 眼眶放血法 抓取小鼠,压迫颈部,使眼球突出充血,迅速钳取眼球,眼眶内血很快的滴出来, 将血滴入EP管内，达到所需采用量后用棉球压迫眼眶止血。此法所取血量较多，小鼠每次可采血0.2～0.3ml，大鼠每次可采血0.5～lml，动物可存活），标记后送准备室。 * 免疫刺激复合体( immune response-stimulating complexes, ISCOMs)及脂质DC-Chol等。ISCOMs是由皂苷、胆固醇和磷脂组成的复合物,形成直径约40nm笼形结构,结构内的皂苷与胆固醇结合而不与细胞膜表面结合,可显著减轻皂苷的溶血作用。 脂质DC-Chol是一种新型的脂质佐剂,其化学组成为中性磷脂,在水中可形成吸附抗原的 阳离子表面。其粒径大小、电荷和抗原结合能力可随不同组份比例而变化。 免疫血清制备 实验目的和要求 了解影响机体免疫应答强度的因素; 明确初次应答和再次应答抗体产生的规律； 掌握制备牛血清白蛋白（BSA）的抗血清； 熟悉佐剂的制备和动物免疫的常用方法； 了解抗体检测的常用方法。 在免疫学实验中,为制备抗体通常以抗原性物质给动物注射,经一定时间后,动物血清中可产生大量特异性抗体，这种含有特异性抗体的血清称免疫血清。 实验原理 免疫应答的影响因素 抗体的产生通常与抗原的质和量、动物种类以及接种的途径有密切关系。 一、抗原分子的结构和性质 1. 分子量：分子量越大，免疫原性越强。 2. 化学组成及结构 （1）蛋白质 （2）多糖：具有免疫原性, 较蛋白质弱。 （3）核酸：多无免疫原性。 3. 可降解性： L-氨基酸 ? 易降解； D-氨基酸 ? 不易降解。 二、宿主方面的因素 1.遗传因素 同种动物不同品系及不同个体对同种抗原产生不同强度的免疫应答。 2.其他因素 年龄、性别与健康状态（是否有免疫缺陷或使用免疫抑制剂等）。 三、免疫原的剂量及进入途径 （1）剂量 1）剂量不足或过多均不引起免疫应答。 2）重复进入引起强免疫应答。 （2）途径：皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、呼吸道和口服免疫应答水平依次降低。 （3）是否应用佐剂 抗体产生的一般规律 初次应答和再次应答规律。 抗体产生的顺序规律： IgM - IgG - IgA - IgD - IgE 初次应答和再次应答抗体产生比较 免疫佐剂(Adjuvents) 简称佐剂，是一种能非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答、增强相应抗原的免疫原性或改变免疫反应类型，而自身并无免疫原性，不能引起免疫应答反应的物质。 佐剂具有以下几条标准 ①无致癌性 ②无毒性 ③纯度高 ④有一定的吸附力 ⑤在动物体内能被降解吸收 ⑥不含与动物有交叉反应的抗原物质 ⑦不应诱发自身超敏反应 ⑧稳定，储存1 年以上不分解、不变质。 佐剂的分类 无机佐剂：氢氧化铝、磷酸铝、明矾等。 生物性佐剂：微生物及其产物如卡介苗、脂多糖等；细胞因子（IL-1、IL-2、IFN-γ、IL-12和GM-CSF等）和热休克蛋白。 脂质体和免疫刺激复合物：脂质体由不同比例的磷脂和胆固醇组成如ISCOM。 福氏佐剂：免疫动物最常用的佐剂，包括福氏不完全佐剂（液体石蜡/花生油+羊毛脂或吐温-80）和完全福氏佐剂（在不完全佐剂基础上加死卡介苗或结核分枝杆菌） 佐剂作用机理和方式 在注射部位形成抗原储池,可以延缓抗原释放速率,延长免疫反应,提高免疫记忆细胞数量。 例如,矿物胶体、乳剂类佐剂等 有些佐剂具有载体功能,可以改变抗原的物理状态以及它们与免疫系统的作用方式。 例如ISCOMS、脂质体等 具有直接或间接药理作用的佐剂,可以改变参与免疫反应的多种细胞的功能。 佐剂改变参与免疫反应 激活免疫细胞,尤其是巨噬细胞等APC,刺激巨噬细胞产生IL-1，提高免疫细胞的局部浓度，提高APC的抗原递呈功能 通过直接作用于T细胞而发挥作用 活化B细胞，例如LPS可以调节B 细胞表面Ig