人类疾病的动物模型概述.ppt

NOD-SCID(Non-obese diabetic scid mice )小鼠 是在SCID(重症联合免疫缺陷)小鼠的基础上与非肥胖性糖尿病小鼠(NOD/Lt)品系回交的免疫缺陷鼠。NOD/SCID小鼠既有先天免疫缺陷,又有T和B淋巴细胞缺乏,各种肿瘤细胞可以植入,且较少发生排斥反应及移植物抗宿主病(GVHD)。为T、B、NK细胞缺陷的严重联合免疫缺陷动物模型。 寿命较SCID短，4-6个月，适合短期研究。 移植瘤成功率高。 常用于肿瘤、免疫学、胚胎干细胞、艾滋病及肝炎的研究。 转基因动物 概述 是继基因工程发展起来的新兴生物技术 是胚胎工程和基因工程结合的产物。 是研究外源基因在整体动物中表达调控规律的技术。 目前，应用动物转基因技术已建立了许多理想的人类疾病动物模型。 概念 转基因动物（Transgenic animals): 是通过基因工程对DNA进行体外操作，添加或删除一个特殊的DNA序列，然后导入早期的胚胎细胞中，所产生遗传结构得以修饰的动物，其结构的性状可以遗传给后代，并能稳定遗传，由此获得的动物称为转基因动物。 原理 将改建后的目的基因（基因组片段）用显微注射法注入实验动物的受精卵 将该受精卵再植入受体动物的输卵管(或子宫)中 发育成携带外源基因的转基因动物. 基本方法 显微注射法 反转录病毒载体介导法 胚胎干细胞介导法 精子介导法 转基因动物的制作方法—显微注射技术 1.采取受精卵 采取受精卵的方法有： 获得自然排卵的受精卵法 激素诱导排卵法：孕马血清促性腺激素（PMSG，腹腔注射5IU，48-54h后，再腹腔注射人绒毛膜促性腺激素HCG于同一单位体内。 采取未受精卵，在体外受精的方法 2.向受精卵雄性原核注入DNA溶液 通过微分干涉显微镜观察受精卵，会看到两个大的原核。两个核不就即可融合，接着核膜消失。雄性原核要比雌性原核能容纳更多的DNA溶液，一般都是想雄性原核注入DNA溶液。 雄原核注射转基因小鼠 3.向假妊雌小鼠移植 (1)制作假妊小鼠(预先结扎雄性鼠的输精管,而后交配,但未受精) (2)将导入DNA的受精卵移植到假妊母体的输卵管(借用外科手术技术完成） 4.转基因动物的检测 出生小鼠具有(携带)外源基因者仅占 20%-30%. 以Southern blot 印迹法或PCR法对(携带)外源基因进行分析，以此对转基因小鼠进行鉴定。 转基因动物的应用 (1)提高动物优良性状,改善动物产品质量 (2)动物抗病育种 (3)生产药用蛋白 (4)生产人用营养保健(医疗)品 (5)生产可用于人体器官移植的动物器官 (6)建立诊断,治疗人类疾病及新药筛选的动物模型 1997年世界首只克隆羊多莉 世界首只转基因猴 2000年,美国科学家培育出了世界上首只转基因猴。这是世界上首次培育成功转基因灵长类动物，此项成果将为人类最终战胜糖尿病、乳腺癌、帕金森氏症和艾滋病等顽症提供帮助。 世界上首匹“自体克隆马” 2005年意大利科学家成功培育出世界上第一匹通过不育动物制造出的“自体克隆马”，为挽救濒临灭绝的稀有马种带来了曙光。 中国完成世界首例转基因克隆兔实验 左为克隆兔，右为代孕兔。 2007年,我国完成的世界首例转基因克隆兔。实验兔含有外源的绿色荧光蛋白基因，证明其为转基因克隆兔。 * * * * * * * * * * 血管内膜损伤动物模型 动物：250～300g大鼠 方法一：手术分离血管（动脉或静脉），欲致内膜损伤段两头阻断，抽空积血后，用氮气吹该段血管。 方法二：手术分离动脉血管，根据血管直径，选择相应规格的介入用球导管，排空气囊，插入血管内，充气后抽出；根据要求损伤的程度不同，可以一次或多次反复。（球囊损伤法） 心脏缺血和心肌梗塞动物模型 冠脉动脉阻断法：结扎法的部位是 1.大、小鼠：一般选择在左心耳与肺动脉 圆锥之间，平左心耳下缘的冠状动脉左前降支近段； 2.兔： 体重2～3kg，手术时，宜低位结扎其左前降支和左冠状动脉旋支； 3.犬：体重10～25kg，手术时，开胸结扎左前降支第三分支根部或采用前降支根部和根部下约5mm处双重结扎。 大鼠心脏缺血模型 心肌缺血结果图 模型操作图 沁尿系统疾病动物模型 —慢性肾功能衰竭动物模型 一、肾切除动物模型： 采用 5/ 6 肾切除 ( 5/ 6 nephrectomy , 5/6NT) 的方法可建立伴有慢性肾功能衰竭的肾间质纤维化动物模型。（二期法） 动物：大鼠 手术第一步：切除 左肾的上下级各1/3，明胶海绵压迫切面止血。第二步：左肾手术1周后，行二期手术，同样方法切除右肾。 慢性肾功