第五部分固定化酶.pptVIP

（三） 固定化酶的活力 固定化酶的活力即是固定化酶催化某一特定化学反应的能力。其大小可以用在一定条件下它所催化的某一反应的反应初速度来表示。 它的单位可定义为每毫克干重固定化酶每分钟转化底物的量：用μmol/ min ·mg 或μmol·min-1/cm 2 1） 活力测定方法分为： 间歇测定：在搅拌或振荡反应器中，在与溶液酶同样测定条件下进行，然后间隔一定时间取样，过滤后按常规进行测定。 连续测定：固定化酶装入具有恒温水夹套的柱中，以不同流速流过底物，测定酶柱流出液，根据流速和反应速度之间关系，算出酶活力。 * 活力回收= ×100% 3） 固定化酶的半衰期 在连续测定条件下，固定化酶的活力下降为最初活力一半所经历的连续工作时间称为固定化酶的半衰期。以t1/2表示。 固定化酶的操作稳定性是影响使用的关键因素，半衰期是衡量稳定性的指标。 2） 固定化酶的活力回收 * 四、固定化酶的应用 Go Go Go Go 3.在分析化学中的应用 1.在工、农业生产上的应用 2.在医药、治疗上的应用 * 1、固定化酶在工农业生产上的应用 产 物 酶或细胞 固定化方法 原 料 L-氨基酸 果糖浆 6-APA L-门冬氨酸 L-苹果酸 低乳糖牛奶 乳糖 干蛋白 果汁脱苦 啤酒 植物白脱 脂肪酸 氨基酰化酶 葡萄糖异构酶或含该酶之菌体 青霉素酰胺酶 含有门冬氨酸的菌体 含有反丁烯二酸酶的菌体 乳糖酶 碱性蛋白酶 葡萄糖氧化酶和氧化氢酶 柚苷酶 木瓜蛋白酶 脂肪酶 脂肪酶 载体结合法 载体结合法或交联法 载体结合法 胶格包埋法 胶格包埋法 载体结合法 载体结合法 胶格包埋法 载体结合法 载体结合法或包埋法 胶格包埋法 载体结合法 乙酰-DL-氨基酸 葡萄糖 青霉素G 反丁烯二酸 反丁烯二酸 牛奶 牛奶 蛋白 桔类果汁 生啤酒 植物油 植物油 * 产 物 酶或细胞 固定化方法 原 料 类固醇 L-丙氨酸 D-苯甘氨酸 ATP 核苷酸类味精 乙醇 啤酒 L-亮氨酸 乙酸 乳酸 淀粉酶 杆菌肽 氢气 含脱氢酶及羟化酶的菌体 含有L-门冬氨酸、β-脱羧酶的菌体 氨基酰化酶 乙酰激酶 5’-磷酸二酯酶，5’-腺苷酸脱氨酶 Sacharomyces carlsbergensie 或S.Cerevisiae 同上 Serratia marcescens Aectobcter.sp. 乳酸杆菌与酵母 Bacillus substilis Bacill sp. Clostridium butyicum Rhodospirillium rubrum 胶格包埋法 包埋法 载体结合法 载体结合法 载体结合法 角叉胶或聚丙烯 酰胺胶包埋 聚乙烯氯或多孔砖 吸附或海藻酸包埋 角叉胶包埋 水合氧化钛吸附 明胶包埋 聚丙烯酰胺胶包埋 聚丙烯酰胺胶包埋 聚丙烯酰胺或琼脂包埋 类固醇前体 L-门冬氨酸 乙酰-DL-苯基苷氨酸 ADP RNA 葡萄糖培养基 苏氨酸培养基 乙醇培养基 * 实例： A.葡萄糖异构酶 世界上生产规模最大，应用最为成功的一种固定化酶。 * 泵 储 罐 反应产物 离心机 消旋反应器 固定化酶柱子 晶体 L-Ala L-Ala A-D-Ala A-L-Ala A-D-Ala B. 氨基酰化酶（Aminoacylase） 世界上第一种工业化生产的固定化酶 * 2、固定化酶在医药治疗上的应用 溶液酶的应用缺陷： 酶作为异体物质，在体内应用会导致免疫反应 酶是蛋白质，在体内易被网状内皮系统移除和被蛋白质酶水解破坏 由于稀释效应，药物酶无法集中于靶器官组织以达到治疗所需的最适高浓度 * （1）转入体内发挥作用（口服和注入） 口服：最初主要限于消化酶类，近年来也有人尝试将酶以口服方式用于尿中毒等疾患的治疗。口服的优点是药物通过粘膜吸收后能迅速进行扩散，进入体内，通常不会引起免疫反应。 注入：是最有实用价值的一种方式，溶液酶的弱点集中于此方式。 固定化酶可很好的地解决这一问题，办法是将药物酶包埋于半透膜中，可防止药物酶和蛋白水解酶以及其它免疫因子等直接接触，因而可延长酶在体内的半衰期和避免免疫过敏反应。 * （2）通过“体外循环”做成人工脏器 固定化酶也可做成“人工脏器”参与体外循环，