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第十一部分发酵产物分离原理与技术
第一节 沉淀法
第二节 吸附法
第三节 离子交换法
第四节 萃取法
第五节 膜分离技术; 第一节 沉淀法
沉淀是物理环境的变化引起溶质的溶解度降低、生成固体凝聚物的现象。
沉淀措施因产品性质不同而不同。
加酸、碱、盐、有机溶剂、其它物质。;根据所加入沉淀剂的不同,沉淀法可分为:;一、等电点沉淀法
利用两性电解质在等电点的溶解度最低和不同电解质有不同等电点的特性,将两性电解质分离的方法。
通过加酸或碱调pH=pI,蛋白质分子的净电荷为零,分子聚集在一起。
注意:pH过低,容易引起目标蛋白质变性。;二、 盐析沉淀法
1.盐与蛋白质溶解度的关系:
(1)盐溶:[盐]低时,S随[盐]增加而增加;
(2)盐析:[盐]高时,S随[盐]增加而降低;
;溶解度与盐浓度的关系可用下式表示:
logS=β-KS·I
S:蛋白质的溶解度;
I:离子强度;
β:常数,与蛋白质种类有关,与盐的种类无关;
KS :盐析常数,与盐种类有关,与温度和pH无关;;2.机理
蛋白胶体稳定的原因是蛋白质颗粒周围水化膜和电荷的存在。加入盐,中和表面电荷、破坏水化膜。
3.影响盐析的因素
(1)盐种类:影响KS,KS越大,效果越好
(2)盐析剂用量
(3) 温度和pH:影响β值而影响S。尤其是影响相对溶解度
(4) 杂质;4. 注意事项
①[盐] 因被提取物种类不同而不同;
②杂质对盐析有影响;
③盐析时的pH ≈ pI(?);
④盐析产品还需进一步纯化(?);;三、有机溶剂沉淀法
利用某些物质在有机溶剂中的溶解度不同而使其分离的方法。
1.原理:
有机溶剂能降低溶液的介电常数,使溶质分子间因引力而凝集;或破坏水膜(降低水活度)而溶解度降低;或破坏蛋白质的某种键,改变其空间结构而使疏水基团暴露而析出。
优点:溶剂易除;
缺点:易使蛋白质变性; ;2.影响有机溶剂沉淀的因素:
①溶剂的种类和数量:丙酮乙醇甲醇
②沉淀的温度:温度越低沉淀越完全。;第二节 吸附法;一、吸附法的原理;三、吸附法的优缺点;四、吸附的类型;;五、吸附剂的基本要求; 六、吸附剂的类型
工业用吸附剂主要有三类型:
1、疏水或非极性吸附剂
适合于从极性溶媒(水)中吸附溶质。
代表是活性碳,有疏水性。在极性液中,吸附力:溶质溶媒,有环无环。;2、亲水或极性吸附剂
适用于从非极性或小极性溶媒中吸附溶质。
代表:硅胶,氧化铝,活性土(铝硅酸),有酸性、碱性、中性之分。
碱性物质→→酸性吸附剂,反之亦然。;3、离子交换树脂吸附剂
属极性吸附剂,与极性吸附剂不同的是,还具有离子交换的性能。;七、 影响吸附过程的因素;2、吸附物的性质
有下列一些规则可用来预测吸附的相对量。
能使表面张力降低的物质,易为表面吸附;
溶质从较易溶解的溶剂中吸附时,吸附量较少。
极性吸附剂易吸附极性物质,非极性吸附剂易吸附非极性物质。
对于同系列物质,吸附量的变化是有规则的。如按极性减小的次序排列,次序越在后面的物质,极性越低,因而越易为非极性吸附剂所吸附而越难为极性吸附剂所吸附。;3、 溶液pH值的影响
pH值影响某些化合物的离解度。
4、温度的影响
吸附热越大,则温度对吸附的影响越大。
5、其它组分的影响
当从含有两种以上组分的溶液中吸附时,根据溶质的性质可以互相促进,干扰或互不干扰。一般说来,对混合物的吸附较纯物质的吸附为差。;第三节 离子交换法;一、基本原理;二、离子交换的类型
按组分:(有机、无机)离子交换剂。
按性能:(阳、阴、两性、吸附型、选择型、氧化还原型)离子交换剂。
(1)阳离子交换剂
强酸型: (-R-SO3H)
中性:
弱酸性:;(2)阴离子交换剂
都含有氨基
强:季胺盐[-N+(CH3)3];
弱:叔-N(CH3)2,、仲(-NHCH3)、伯(-NH2)。
(3)两性离子交换剂
交换剂本体上同时带有酸性和碱性基团。;三、离子交换树脂的理化性能
1、 对离子交换树脂的一般要求:
(1)容量大。(活性基团/重量)。
多含活性基团;基团能完全电离。
(2)良好的可逆性。
(3)适宜的机械强度。
(4)化学稳定性。;2、离子交换树脂的处理、再生、转型、保存
(1)处理:
树脂浸泡→酸处理→碱处理液→水洗
(2)再生:
使用过的树脂恢复到原状况的方法(往往只作简单转型处理)。
(3)转型:
使树脂上带上使用时希望的离子。 ;如:
Na型:用氢氧化钠;
H型:用盐酸处理;
NH4+型:用氨水处理;
(4)保存:中性盐保存
阴离子交换树脂,Cl-型较OH-稳定。
阳离子交换树脂。Na+型稳定。 ;3、交换树脂的理化特性
(1)颗粒度:
颗粒小,交
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